杭白菊中多菌灵残留的免疫快速检测方法构建

摘要

杭白菊是浙江省最具有地域特色的传统中药材“浙八味”之一，主要种植在浙江桐乡一带。近年来，为了满足国内外对杭白菊的大量需求，栽种培养已成为工业化农业模式，为提高产量，在防治病虫害时，农药用量往往会偏高，且参差不齐，使杭白菊被农药污染，存在农药残留。其中，农药多菌灵是杭白菊常用农药之一，该农药的欧盟MRL值为0.1（mg/kg），被欧盟分类为可能危害胎儿，可能损害（男性）生殖能力，并可能造成遗传基因损害。本文主在建立Ic-ELISA和试纸条两种方法，来实现杭白菊中多菌灵的免疫快速检测方法的构建。结果表明：试纸条的检出限（100μg/L）与Ic-ELISA的检出限（4.13μg/L）均在MRL（100μg/L）内。相较于仪器检测的前处理需要提取、浓缩和净化等多个步骤操作，Ic-ELISA和试纸条的样品前处理更为便捷，同时Ic-ELISA可高通量检测，实现在实验室内对杭白菊中多菌灵的大批量检测；试纸条在检测过程中具有方便快捷等优势，可实现对杭白菊中多菌灵的现场快速测试诊断。

关键词：多菌灵；半抗原；抗体；Ic-ELISA；试纸条；杭白菊；免疫快速检测

目录

1.引言 4

1.1背景介绍 4

1.2 单抗细胞及抗体的制备 5

1.3农药残留免疫分析方法 5

1.3.1酶联免疫吸附分析（ELISA） 5

1.3.2胶体金免疫分析 6

2.多菌灵抗体的制备 6

2.1人工抗原制备 6

2.2 动物免疫 7

2.3 细胞融合及优化 8

2.4 腹水制备及纯化 8

2.5结果与分析 9

2.5.1小鼠尾血效价 9

2.5.2 多菌灵稳定株细胞上清Ic-ELISA标准曲线的建立 9

3.杭白菊中多菌灵的酶联免疫吸附检测 10

3.1材料 10

3.2仪器设备 10

3.3ELISA方法建立与优化 10

3.3.1 ELISA方法建立： 10

3.3.2Ic-ELISA方法的优化： 11

3.4Ic-ELISA检测杭白菊茶样中多菌灵添加回收率 12

3.5结果与分析 12

3.5.1采用Ic-ELISA方法筛选包被原与抗体最优浓度组合 12

3.5.2Ic-ELISA标线中甲醇含量的优化结果 12

3.5.3Ic-ELISA标准曲线的建立 13

3.5.3Ic-ELISA测定杭白菊茶样中多菌灵添加回收率 13

4.杭白菊中多菌灵的胶体金免疫层析检测 14

4.1材料 14

4.2仪器设备 14

4.3试纸条方法建立与优化 14

4.3.1 试纸条方法建立： 14

4.3.2 试纸条灵敏度与准确度检测 15

4.4结果与分析 15

5. 小结与讨论 16

参考文献 17