白藜芦醇对小鼠肾脏衰老的影响

白藜芦醇对小鼠肾脏衰老的影响

摘    要

衰老是人类不可避免的复杂生理现象，而肾脏是伴随着衰老而出现明显形态和功能改变的重要器官之一。有研究发现，长期高脂饮食习惯会严重影响大鼠的认知能力，使机体出现提前衰老的症状[1]。白藜芦醇是一种生物性很强的天然多酚类物质，它不仅是植物遭受胁迫时产生的一种能提高植物抵抗病原性攻击和环境恶化的植物抗毒素, 还具有抗癌[2]、抗氧化[3]、调节血脂[4]、影响寿命[5]等多方面有益于人类健康的重要功能。沉默信息调节因子-2家族在很多种模式生物中已经成为一类对于衰老起着关键作用的调控因子，它们具有高度保守的酶催化核心结构区域。哺乳动物Sirtuins家族由7个成员组成， 其中SIRT1被多次认定为长寿基因[6]。近年来，越来越多的研究发现SIRT6作为哺乳动物中NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶，对机体寿命调控有重要作用[7]。研究发现：白藜芦醇等植物中多酚类小分子主要是通过激活组蛋白去乙酰化酶的活性，进而调控下游基因转录及活性来实现的[8]。

本试验中使用的实验动物是经过高脂饮食、高脂饮食加白藜芦醇、正常饮食、正常饮食加白藜芦醇四种培养方式培养三个月后获得的，提取肾脏组织后分别进行PAS、HE、Masson、β-gal染色。提取组织蛋白和RNA，通过western blot来检测SIRT6的表达量以及NF-κB的乙酰化水平，通过Real-time PCR技术检测SIRT6的RNA表达水平。研究结果：从四种染色结果分析发现白藜芦醇对高脂饮食引起的肾脏早老具有改善作用，但对于正常饮食的小鼠肾脏无明显作用；进行高脂饮食处理的小鼠肾脏SIRT6表达量最低，乙酰化的NF-κB表达量最高，经过白藜芦醇作用后，SIRT6表达量升高，乙酰化的NF-κB表达量下降；对于正常饮食的小鼠是否加入白藜芦醇对SIRT6和乙酰化的NF-κB表达量的影响不大。从而得出，白藜芦醇确实可以改善由高脂饮食引起的肾脏衰老，而且可能是通过调节NF-κB的乙酰化水平来实现的，但对于正常饮食的小鼠，白藜芦醇没有明显的改善作用。

关键词：肾脏衰老，白藜芦醇，高脂饮食，SIRT6，NF-κB

Abstract 

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目       录

1  绪论 1

1.1 课题背景及目的 1

1.2 国内外研究状况 3

1.3 范文构成及研究内容 10

2  研究方案 12

2.1 研究目标 12

2.2 仪器设备、材料、试剂药品的选择 12

2.3 实验内容 13

3  实验结果 18

3.1 PAS染色结果 18

3.2 HE染色结果 19

3.3 Masson染色结果 21

3.4 SA-β-gal 染色结果 22

3.5 Western-blot 结果 24

3.6 Real-time PCR 结果 25

4  讨论与展望 26

4.1 高脂饮食诱导肾脏衰老 26

4.2 白藜芦醇对高脂饮食引起的肾脏衰老有缓解作用 27

4.3 SITR6在白藜芦醇缓解衰老过程中发挥作用 28

4.4 展望 28

结论 31

致谢 32

参考文献 33

附录A  BCA 法测蛋白质浓度 35

附录B  western blot 操作方法 36

附录C  Real-time PCR 操作流程 39