成年线虫线粒体未折叠蛋白质反应失活的基因筛选

成年线虫线粒体未折叠蛋白质反应失活的基因筛选

摘    要

线粒体未折叠蛋白质反应是近年来才被关注的线粒体修复反应，对于线粒体功能的维持具有重要作用，但是其具体特性和机制并不清楚，其中有一个非常有意思的现象是成年线虫线粒体未折叠蛋白质反应会失活。本文发现线粒体未折叠蛋白质反应不能被内质网抑制剂激活，内质网未折叠蛋白质反应也不能被线粒体抑制剂激活。本文确定了RNAi（atp-2，spg-7）及抗霉素A不能诱导线粒体未折叠蛋白质反应的时期分别在线虫L4时期和成虫第六天。并利用RNAi基因筛选的方法对spg-7 RNAi诱导线虫线粒体未折叠蛋白质反应失活进行了研究。对转录因子，激酶和神经肽三个文库约1036个基因筛选，找到了zip-1和mbk-2两个基因。除此之外，还发现了一些出乎意料的现象：1）不同浓度的抗霉素A对于线粒体未折叠蛋白质反应诱导的影响并不大；2）高渗环境并没有诱导线粒体未折叠蛋白质反应的发生；3）在线粒体未折叠蛋白质反应发生时，线虫并没有表现出躲避食物的行为。本文的结果为线粒体未折叠蛋白质反应消失的研究奠定了基础，对于线粒体未折叠蛋白质反应的研究具有重要意义。

关键词：线粒体未折叠蛋白质反应，线虫，RNAi基因筛选 

Abstract

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目      录

1绪论 1

1.1课题背景及目的 1

1.2 国内外研究现状 3

1.2.1 未折叠蛋白质反应 3

1.2.2 线粒体未折叠蛋白质反应及其机理 5

1.2.3 成年线虫线粒体未折叠蛋白质反应失活 7

1.2.4 线粒体未折叠蛋白质反应与线粒体自噬的关系 8

1.3 课题研究方法 9

1.4范文构成及研究内容 10

2 研究方案 11

2.1 研究目标 11

2.2 仪器设备、材料、试剂药品的选择 11

2.3 实验内容 12

2.3.1 线虫化冻、培养及冻存 12

2.3.2 线虫周期同步化 13

2.3.3 线虫线粒体未折叠蛋白质反应消失的时期确定 13

2.3.4 线虫线粒体未折叠蛋白质反应消失的基因筛选 14

2.3.5 atfs-1点突变质粒的构建 15

2.3.6 其他实验方法 15

3 实验结果 17

3.1 RNAi活性检测 17

3.2 线虫线粒体未折叠蛋白质反应消失时期测定 18

3.3 线粒体未折叠蛋白质反应消失的基因筛选 25

3.4 线粒体未折叠蛋白质反应的特性 27

3.4.1 不同浓度抗霉素A对线粒体未折叠蛋白质反应的影响 27

3.4.2 线粒体未折叠蛋白质反应的特异性检测 28

3.4.3 目前已知线粒体未折叠蛋白质反应有关的基因抑制 30

3.4.4 发生线粒体未折叠蛋白质反应时线虫的避食行为 31

3.5 atfs-1点突变质粒构建及检测 32

4 讨论与展望 35

4.1 成年线虫线粒体未折叠蛋白质反应失效 35

4.2 线虫线粒体未折叠蛋白质反应的基因筛选 36

4.3线虫线粒体未折叠蛋白质反应的特性 38

4.4 atfs-1点突变质粒及应用 39

4.4 展望 40

结论 42

致谢 43

参考文献 44

附录A 49

附录B 51

附录C 53

附录D 55

附录E 56

附录F 57

附录G 58

附录H 59