XCLW35114 BA脂质体抗肝缺血-再灌注损伤的实验研究 (字数:8911)【摘要】目的:观察BAPTA-AM对肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)的防治作用,并探讨其作用机制。方法:采用氧糖剥夺(OGD)-再灌注致HepG-2细胞损伤,通过检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(..
XCLW35114 BA脂质体抗肝缺血-再灌注损伤的实验研究 (字数:8911) 【摘要】目的:观察BAPTA-AM对肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)的防治作用,并探讨其作用机制。 方法:采用氧糖剥夺(OGD)-再灌注致HepG-2细胞损伤,通过检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的含量,MTT法检测细胞活力,Annexin V-EGFP/PI荧光染色检测细胞死亡率,A23187拮抗实验及Fura-2AM测定细胞内游离钙浓度等方法,评价BAPTA-AM对缺血再灌注损伤肝细胞损伤的影响。结果:BAPTA-AM能够显著地抑制氧糖剥夺-再灌注引起的HepG-2细胞活性的降低,改善肝细胞的酶学指标,还能抑制HepG-2细胞的坏死和细胞内游离钙浓度的升高,也发现其保护作用能被A23187减弱。结论:BAPTA-AM对肝脏缺血再灌注损伤具有显著的防治作用,是一种有潜力的抗HIRI药物。 【关键词】 BAPTA-AM,缺血再灌注, HepG-2细胞,细胞坏死, 细胞凋亡 目 录 1 绪 论 1 1.1立题意义 1 1.2肝损伤的类型及机制 1 1.2.1自由基致肝损伤 1 1.2.2肝细胞内钙超载 2 1.2.3细胞因子 2 1.3 BAPTA-AM简介 2 1.4本文的研究主要内容 3 2 BAPTA-AM抗OGD-再灌注致HepG-2细胞损伤作用 5 2.1 材料 5 2.1.1 细胞株 5 2.1.2药品与试剂 5 2.1.3实验仪器 6 2.2 方法 6 2.2.1细胞的培养与传代 6 2.2.2 OGD-再灌注致细胞损伤模型的建立 6 2.2.3 BAPTA-AM对OGD-再灌注致HepG-2细胞损伤的影响 7 2.2.4 一般形态学观察BAPTA-AM的抗细胞损伤作用 7 2.2.5 Annexin V-EGFP/PI荧光染色观察BAPTA-AM对细胞死亡的影响 7 2.2.6 A23187拮抗BAPTA-AM抗HepG-2细胞OGD-再灌注损伤的作用 7 2.2.7细胞内游离钙浓度的测定 8 2.2.8统计处理 8 2.3结果与分析 8 2.3.1 OGD-再灌注致细胞损伤模型的建立 8 2.3.2 BAPTA-AM抗OGD-再灌注致HepG-2细胞损伤 9 2.3.3 BAPTA-AM对肝细胞培养上清液中各酶学指标的影响 10 2.3.4一般形态学观察BAPTA-AM的抗细胞损伤作用 11 2.3.5 Annexin V-EGFP荧光染色的结果与分析 12 2.3.6 A23187拮抗 BAPTA-AM对HepG-2细胞的保护作用 13 2.3.7 BAPTA-AM对细胞内游离钙浓度的影响 14 2.4 讨论 14 结 论 16 参考文献 17 致 谢 19
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