BA脂质体抗肝缺血-再灌注损伤的实验研究

XCLW35114  BA脂质体抗肝缺血-再灌注损伤的实验研究  (字数：8911)

【摘要】目的：观察BAPTA-AM对肝脏缺血再灌注损伤（hepatic ischemia-reperfusion injury，HIRI）的防治作用，并探讨其作用机制。

方法：采用氧糖剥夺（OGD）-再灌注致HepG-2细胞损伤，通过检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）的含量，MTT法检测细胞活力，Annexin V-EGFP/PI荧光染色检测细胞死亡率，A23187拮抗实验及Fura-2AM测定细胞内游离钙浓度等方法，评价BAPTA-AM对缺血再灌注损伤肝细胞损伤的影响。结果：BAPTA-AM能够显著地抑制氧糖剥夺-再灌注引起的HepG-2细胞活性的降低，改善肝细胞的酶学指标，还能抑制HepG-2细胞的坏死和细胞内游离钙浓度的升高，也发现其保护作用能被A23187减弱。结论：BAPTA-AM对肝脏缺血再灌注损伤具有显著的防治作用，是一种有潜力的抗HIRI药物。

【关键词】 BAPTA-AM，缺血再灌注， HepG-2细胞，细胞坏死, 细胞凋亡

目 录

1 绪 论 1

1.1立题意义 1

1.2肝损伤的类型及机制 1

1.2.1自由基致肝损伤 1

1.2.2肝细胞内钙超载 2

1.2.3细胞因子 2

1.3 BAPTA-AM简介 2

1.4本文的研究主要内容 3

2  BAPTA-AM抗OGD-再灌注致HepG-2细胞损伤作用 5

2.1 材料 5

2.1.1 细胞株 5

2.1.2药品与试剂 5

2.1.3实验仪器 6

2.2 方法 6

2.2.1细胞的培养与传代 6

2.2.2 OGD-再灌注致细胞损伤模型的建立 6

2.2.3 BAPTA-AM对OGD-再灌注致HepG-2细胞损伤的影响 7

2.2.4 一般形态学观察BAPTA-AM的抗细胞损伤作用 7

2.2.5 Annexin V-EGFP/PI荧光染色观察BAPTA-AM对细胞死亡的影响 7

2.2.6 A23187拮抗BAPTA-AM抗HepG-2细胞OGD-再灌注损伤的作用 7

2.2.7细胞内游离钙浓度的测定 8

2.2.8统计处理 8

2.3结果与分析 8

2.3.1 OGD-再灌注致细胞损伤模型的建立 8

2.3.2 BAPTA-AM抗OGD-再灌注致HepG-2细胞损伤 9

2.3.3 BAPTA-AM对肝细胞培养上清液中各酶学指标的影响 10

2.3.4一般形态学观察BAPTA-AM的抗细胞损伤作用 11

2.3.5 Annexin V-EGFP荧光染色的结果与分析 12

2.3.6 A23187拮抗 BAPTA-AM对HepG-2细胞的保护作用 13

2.3.7 BAPTA-AM对细胞内游离钙浓度的影响 14

2.4 讨论 14

结 论 16

参考文献 17

致 谢 19