HPLC法测定龙胆配方颗粒中龙胆苦苷的含量_开题报告

（一）HPLC法发展概述

1903年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”（Chromatography）和“色谱图”（Chromatogram）的概念。茨维特使用色谱法 chromatography （来自希腊字， chroma 意思是颜色， graphy 意思是记录 - 直译为颜色记录）来描述他的彩色试验。（令人好奇的是，俄罗斯名字茨维特意思是颜色。）他在^范文中写到：“（原文）一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”

1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。

1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。

1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。

1960年中后期，气相色谱理论和实践发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。

1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分析精度。

1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等。

（二）龙胆苦苷来源

本品为龙胆科植物条叶龙胆Gentiana manshurica Kitag.、龙胆 Gentiana scabra Bunge、三花龙胆 Gentiana triflora pall 或坚龙胆Gentiana rigescens Franch. 的干燥根及根茎.龙胆苦苷(Gent iopicroside)是龙胆科龙胆属植物龙胆的有效成分之一，也是当药及獐芽菜等植物中的苦味成分，属于裂环环烯醚萜苷类，分子式为C16H20O9 ，白色粉末或淡黄(红)色结晶，易溶解于水、甲醇及乙醇等溶剂，阳光下易变色.龙胆具有利胆、抗炎、健胃、降压等作用。龙胆中主含环烯醚萜苷类成分，龙胆苦苷为其中主要有效成分。

全球龙胆属龙胆科( Gentiana L．) 植物超过500种，其中以热带高山以及温带地区分布较为广泛，此类植物在我国也有广泛分布，其种类超过230 种，西南部为其主要产地，大部分龙胆属龙胆科植物均用于观赏，也有部分可入药。

来源于龙胆的干燥根及根茎，也是当药及獐牙菜等植物的苦味成分。

（三）龙胆苦胆的应用

龙胆苦苷具有保护肝脏、抗氧化、抗炎、镇痛及抗肿瘤等作用.

1.抗炎作用

陈长勋等报道，秦艽所含龙胆苦苷具有抗炎作用，即龙胆苦苷可减轻二甲苯所致小鼠耳肿胀，抑制冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，阻止角叉菜胶及酵母多糖所致大鼠足跖肿胀，但对制霉菌素所致的炎症模型无明显作用.

2.保肝作用

刘占文等研究探讨了龙胆苦苷的肝保护作用，发现龙胆苦苷可明显降低四氯化碳所致急性肝损伤小鼠血清ALT，AST水平，增加肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力，提高大鼠胆流量及胆汁中胆红素含量，故认为龙胆苦苷具有明显的肝保护作用.研究发现，龙胆苦苷可显著抑制由四氯化碳和D-氨基半乳糖所致急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶的升高，从而对肝脏起保护作用。刘涛等通过对四氯化碳损伤大鼠肝脏和新鲜肝细胞体外筛选模型进行观察，证实龙胆苦苷具有明显的抗四氯化碳肝损伤作用；李艳秋等通过对四氯化碳、TAA及D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤及豚鼠同种免疫性肝损伤模型的研究发现，龙胆苦苷对化学性及免疫性肝损伤具有保护作用，即龙胆苦苷可显降低多种急性肝损伤和慢性肝损伤动物血清氨酶，减轻肝组织片状坏死、肿胀及脂肪变性的程度，促进肝脏的蛋白质合成.Kondo等将龙胆苦苷分别作用于四氯化碳和脂多糖/卡介苗所致的肝损伤模型，均发现龙胆苦苷具有一定的保肝作用.

3. 镇痛作用

陈雷等报道，龙胆苦苷具有镇痛作用，即经皮下注射给予小鼠龙胆苦苷，可减少小鼠的扭体次数，提高小鼠痛阈阈值，且此作用呈良好的量效关系；龙胆苦苷可明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，降低蛋清所致大鼠足趾肿胀，抑制大鼠肉芽肿.Chen 等报道，龙胆苦苷通过下调N R2B 受体，对持久性炎症性疼痛起显著的镇痛作用.

4.健胃作用

研究发现，经胃瘘管注入龙胆苦苷可使胃液中游离酸含量提高，降低胃内pH 值;舌下涂抹龙胆苦苷可使胃液量稍微增加，而静脉给药胃液量基本不增加，提示龙胆苦苷刺激胃液和胃酸分泌的作用方式为直接作用。

5.抗肿瘤作用

Cho u 等对龙胆苦苷对肝癌细胞Hep 3B 的细胞毒作用进行了研究，结果表明收效甚微，另据报道，龙胆苦苷在体外对人肺腺癌细胞株A 549 具有一定的抑制作用.黄馨慧等报道，龙胆苦苷可抑制SMMC-7721 人肝癌细胞的增殖.

6.抗氧化作用

龙胆苦苷具有清除自由基的能力，龙胆苦苷标准品质量浓度在0.25 ～ 10.00 g/L时清除氢氧自由基能力随质量浓度的增加呈增长趋势，清除率达40.74 %～ 87.03 %.据报道，龙胆苦苷抗氧化活性RC50为0.75 g/L。

二、^范文提纲

1引言

2HPLC法的应用概述

2.1在鉴别中的应用

2.2在杂质检查中的应用

2.3在检测药物含量上的应用

2.4在药效检测上的应用

2.5高效液相色谱在药物残留上的应用

3 HPLC法测定龙胆配方颗粒中龙胆苦苷的含量

3.1材料与方法

3.2实验方法

3.3实验结果

4结论

三、参考文献

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