浅谈抗乙肝病毒靶向药物的发展方向_开题报告

一、文献综述

(一)乙肝现状

乙肝病毒(HBV)感染已经成为一种全球性危害。全球60亿人口中,约20亿人有HBV感染,3.5亿人为慢性HBV感染,其中25%～ 40%最终将死于肝硬化或肝细胞癌,每年因乙肝相关疾病而死亡的人数高达100多万例。[1]  

（二）传统药物存在的问题

目前用于慢性乙型肝炎治疗的传统药物主要有干扰素和核苷类似物( 拉米夫定，阿德福韦，恩替卡韦，替比夫定，替诺福韦)。干扰素抗病毒具有广谱性，但它对细胞抗病毒作用是间接的，而且是非特异性的。尽管干扰素被认为是目前最有价值的抗HBV制剂,但总显效率也不超过40%,并且对“母婴垂直传播”引起的HBV感染显效率更低甚至无效。[2]核苷类似物是 HBV 聚合酶的竞争性抑制剂，这类制剂只能抑制 HBV 的复制，疗效有限。同时，耐药突变体的出现也为抗 HBV 治疗提出了新的挑战。[3]因此，将药物直接输送至肝组织，提高药物疗效，降低毒副作用，开发抗乙肝病毒靶向药物成为今后研究主要方向。

（三）现阶段乙肝靶向药物的发展方向

现阶段对抗乙肝病毒药物靶向制剂的研究，主要有三个方向：基于基因技术的靶向药物、受体介导的靶向药物、载体介导的靶向药物。

（1）基于基因技术的靶向药物发展方面：（1）ＲＮＡｉ技术：RNA干扰(RNA interference)是一种由双链RNA诱发降解同源mRNA的基因沉默(gene silencing)现象。ＲＮＡｉ 能 通 过 ｓｉＲＮＡｓ （ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡｓ）作用来关闭特定的基因表达。该作用除了具有高度的特异性、高效性外,人们还可以针对病毒基因保守区域选择多个靶点进行RNAi治疗,以应对病毒变异产生逃避突变株,更重要的是RNAi在病毒非活跃复制期也能发挥作用。【3】已有国外学通过针对 ＨＢＶ 基因组中不同编码区来设计相应的ｓｉＲＮＡ 分 子，并 在 体 外 培 养 细 胞 和 ＨＢＶ急性感染的小鼠模型中发挥了很好的抑制病毒复制的作用。【4】但siRNA的体内输送和转染依然是限制RNAi相关药物研发的关键问题。(2) 序列特异性 ＤＮＡ 结合蛋白：锌指蛋白（ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏ－ｔｅｉｎｓ，ＺＦＰｓ）等 ＤＮＡ 结合蛋白已被广泛用于调节目的基因的表达。这些 ＤＮＡ 结合蛋白起初作为真核转录因子存在于细胞核内，因此，可以把他们设计成针对特定 ＤＮＡ 序列起作用的 ＤＮＡ 结合蛋白。通 过 改 造 ＤＮＡ结合蛋白，使之作用于ｃｃｃＤＮＡ 靶位点，产生 ＤＳ－Ｂｓ，诱发 ＤＮＡ 修复机制，形成基因敲除突变体，抑制 ＨＢＶ 基因的表达。[5]目前，设计和应用比较成功的 ＺＦＰｓ是由 Ｗｅ－ｂｅｒ等设计并合成的一种异二聚体 ＺＦＮ，它们在细胞内不能形成同源二聚体，这一设计最大限度地减少脱靶效应。这种异二聚体 ＺＦＮ 主要靶向作用于乙型肝炎病毒 Ｘ 蛋白（ＨＢｘ）、ＨＢｃＡｇ和聚合酶的开放阅读框。[12]

（2）受体介导的靶向药物发展：（1）去唾液酸糖蛋白受体：去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R),又称肝细胞半乳糖受体(H一Gal一R),仅存于哺乳动物的肝细胞膜上,它能特异性地识别具有半乳糖残基的糖蛋白形成受体一配基复合物,内吞入肝细胞后经溶酶体降解为配基和H一Gal一R，且H一Gal-R不进一步被降解,可重新转运到细胞浆膜上,参与下一轮循环。[6]研究人员合成了N一乳糖酞壳聚糖,并以此为材料制备了去甲斑鳌素纳米粒,结果显示半乳搪修饰壳聚糖载药纳米粒理化性质稳定,同时具有良好的缓释特性,有利于我们进一步研究体内药动学过程.[7]姜华等采用半乳糖衍生物修饰去甲斑鳌酸钠脂质体(NG)L,比较其与去甲斑鳌酸钠脂质体(CN)L的肝靶向作用差异,结果发现GNL肝脏靶向效率是cNL的1.8倍,是去甲斑鳌酸钠注射液的2.9倍.[8] (2) 反义核酸: 反义核酸技术包括反义 ＲＮＡ、反义寡核苷酸和核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅｓ）３大技术。反义 ＲＮＡ 通过激活ＲＮａｓｅ，抑制病毒 ｍＲＮＡ 的起始部位与启动蛋白及核糖体的结合，阻断 ｍＲＮＡ 成熟等多个环节，从而阻 断 ｍＲＮＡ 的 翻 译 过 程。但反义ＲＮＡ 对 ｃｃｃＤＮＡ 池 影 响不大。反义寡核苷酸技术是利用三链 ＤＮＡ 的构建来实现的，然而，它具有明显的剂量依赖性，且效率低，这限制了它在乙型肝炎基因治疗上的应用。核酶是具 有 催 化 活 性 的 特 殊 的 反 义 ＲＮＡ，能 与 靶ｍＲＮＡ 特 异 结 合，并 催 化 ｍＲＮＡ 在 特 定 部 位 断裂。但随着研究的深入，核酶自身的某些缺点逐渐暴露出来，如真核细胞体内的核酶酶切产物不是很稳定，这也限制了核酶在乙型肝炎基因治疗上的应用。

（3）载体介导的靶向药物：（1）脂质体：脂质体介导的靶向药物脂质体(1iposome)是由脂质双分子层组成类似生物膜结构的封闭小囊,药物包裹于囊室内无需化学键形成,有利于保持药物活性.脂质体对肝脏有良好的靶向性,进人机体可迅速被肝内丰富的网状内皮系统吸收,一旦脂质体到达靶组织,可经多种途径发挥作用. 干扰素制成脂质体的体外试验证明其抗乙肝作用病毒为等量游离干扰素的10一1000倍.[9]（2）腺病毒载体：腺病毒是目前基因治疗中应用最广的病毒载体之一，作为非整合类病毒，具有感染的宿主范围广，外源基因表达水平高，在受染细胞内不发生整合，没有致癌和致突变的危险等优点。研究人员通过构建同时表达GFP和shRNA的重组腺病毒载体，体外感染具有HBV持续复制和病毒蛋白表达能力的HepG2.2.15细胞，观察其对HBV复制的抑制效果，验证腺病毒载体输送的shRNA抑制HBV复制的有效性。[10]以腺病毒为载体其主要缺点是目的基因随细胞分裂而丢失,载体本身表达的蛋白抗原性强,限制其反复使用。[11]

二、^范文提纲

引言：乙型肝炎病毒感染现状

1.传统乙肝治疗药物特点和治疗缺陷

1.1干扰素类药物特点和治疗缺陷

1.2核苷类似物类药物特点和缺陷

2．抗乙肝病毒靶向药物研究方向

2.1基于基因技术的靶向药物发展

2.1.1ＲＮＡｉ技术的特点、研究成果、缺点限制

2.1.2序列特异性 ＤＮＡ 结合蛋白的特点、研究成果、缺点限制

2.2受体介导的靶向药物

2.2.1去唾液酸糖蛋白受体的特点、研究成果、缺点限制

2.2.2反义核酸的特点、研究成果、缺点限制

2.3载体介导的靶向药物。

2.3.1脂质体的特点、研究成果、缺点限制

2.3.2腺病毒载体的特点、研究成果、缺点限制

3.总结展望

三、参考文献

[1]潘　蕾　黄长形　白雪帆 我国乙肝抗病毒治疗现状与思考[J]医学与哲学2005年12月第26卷第12期总第299期

[2] 陈志强； 董俊兴；. 抗乙型肝炎病毒药物研究进展 [J]. 中国药学杂志，2000年，07期

[3] 李茜，姜赛平，张幸国. 抗乙肝病毒治疗的肝靶向药物传递系统研究进展[J]. 中国药学杂志，2012年，18期

[4] 彭金良. RNA干扰及治疗性DNA疫苗抗乙型肝炎病毒研究[Z]中国知网.cnki.net，2006.06.01

[5]Ｈｓｌｅｈ　Ｙ　Ｈ，Ｃｈａｎｇ　Ｙ　Ｙ，Ｓｕ　Ｉ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｐｒｅ－Ｓ２ｍｕｔａｎｔ　ｌａｒｇｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ＤＮＡ　ｄｏｎｂｌｅ－ｓｔｒａｒｄｂｒｅａｋ　ｒｅｐａｉｒ　ａｎｄ　ｌｅａｄｓ　ｔｏ　ｇｅｎｏｍｅ　ｉｎ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｏ　ｃａｒｃｉ－ｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｓ　Ｐａｔｈｏｌ，２０１５．［Ｅｐｕｂ　ａｈｅａｄ　ｏｆ　ｐｒｉｎｔ］

[6] 向敏 丁龙其 抗乙型肝炎病毒靶向药物研究进展[J]传染病药学ThepharmeayofInfeetiousDieesas2003年3月第13卷第l期

[7]王钦,章良,胡玮等.去甲斑蚕素N一乳搪酞壳聚搪纳米粒的制备与体外抗肿瘤活性[J].中国药学杂志,2009,(12).

[8]姜华,杨景明.半乳糖衍生物修饰去甲斑鳌酸钠脂质体的主动靶向性研究[J]数理医药学杂志,2009,(3).

[9]王九平,等.抗乙型肝炎病毒肝靶向药物制剂的研究进展[J]世界华人消化杂志2003年6月15日第11卷第6期

[10]蔡剑晖王春生 慢性乙型肝炎抗病毒治疗药物靶向制剂研究进展[J]中国医院药学杂志1999年第19卷第10期

[11]金晗英 腺病毒载体介导的RNA干扰体外抑制HBV复制的研究[Z]中国知网.cnki.net，2006.11.01

[12]Ｗｅｂｅｒ　Ｎ　Ｄ，Ｓｔｏｎｅ　Ｄ，Ｓｅｄｌａｋ　Ｒ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．ＡＡＶ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｄｅｌｉｖ－ｅｒｙ　ｏｆ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｎｕｃｌｅａｓｅｓ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｓａｃｔｉｖｅ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ，２０１４，９：ｅ９７５７９．