药用植物三叶青中黄酮的提取工艺研究_开题报告

1.1 三叶青简介

三叶青(Radix tetrastigma)为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum)的一味中草药，别名金线吊葫芦、蛇附子《植物名实图考》、石孢子《江西草药》石老鼠、三叶扁藤、拦山虎《广西实用中草药新选》、雷胆子《湖南中草药新医疗资料选编》等[1]。全草可入药，以块根和果实的药用效果最好，在民间有“药王”“抗癌神草”等美誉。主要生长于山谷林中或沟边坡地，喜凉爽气候，适宜在25℃左右生长，耐旱，忌积水。三叶青药材主要分布在浙江、福建、湖南、广西等地，因产地不同，其形状、药性略有差异，其中浙江省三叶青的葫芦状果实呈金黄色，大如莲子，就药性而言属于上品。

三叶青在民间已有较长的药用历史，为中医、藏医常用药材。其名的最早出现于《本草纲目》，“三叶崖爬藤，性味苦、辛、凉，清热凉血、活血祛风”。之后的历代医书也有记载，常用于治疗高热惊厥、淋巴结结核、跌打损伤、扁桃体炎、肺炎、肝炎、风湿等疾病[2]。由于三叶青对生长环境的温度、湿度要求苛刻，并且在自然条件下生长缓慢，加上近年来人为采挖，野生的三叶青已经濒临灭绝[3]。

1.2 三叶青的药用价值

现代药理学研究表明三叶青药材抗肿瘤抗炎作用明显，并且在抗病毒作用、保肝利胆等发面易有确切的疗效。其中，文献报道中，三叶青提取物对肺癌、胃癌细胞体现出较好的抑制作用，提出调节机体的免疫功能是三叶青提取物抗肿瘤的重要机制之一[4-7]。且在治疗血液病及心脑血管疾病、肝炎、感染性疾病、小儿外感高热及低热咳嗽等等方面，临床上的应用也开始展开。

1.2.1 抗肿瘤作用

三叶青提取物可以抑制肺癌、肝癌、结肠癌、黑色素瘤、白血病等癌细胞的生长。丁钢强[8]等研究发现，三叶青的乙酸乙酯提取物对人肝癌细胞HepG2活性具有较强的抑制作用，正丁醇部分也有一定的抑制作用。

冯正权[9]发现三叶青黄酮成分能显著的抑制SGC-7901细胞的生长，得出三叶青中黄酮成分具有抗肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用，有潜力的抗肿瘤价值。

季绍勇[10]研究发现以三叶青为主要成分的中成药“金丝地甲胶囊”，对SCG-7901胃肿瘤细胞、LEWIS肺肿瘤细胞，HL-60人淋巴母细胞性白血病细胞，SMMC-7721肝肿瘤细胞HCT-116结肠肿瘤细胞等都具有明显抑制其细胞生长的效果。

魏克民[11]等研究表明，用三叶青、黄芪、人参皂苷研制而成的金氏片临床治疗恶性肿瘤120例，完全缓解52例，部分缓解42例，稳定18例，进展8例，缓解及部分缓解共有94例，总有效率78.33%，这说明三叶青对防止恶性肿瘤治疗确有一定的功效。并且指出由“杭州天惠医药科技有限公司”研制开发的金氏片是一种适合肿瘤病人及免疫力低下的人群长期服用的功能性保健食品。

程伟[12]等研究发现，在肺癌A549细胞中加入不同浓度的三叶青提取物后，培养48h后，通过测定吸光值，发现随着三叶青提取物浓度增加，对肺癌A549细胞的抑制作用明显增强。

1.2.2 抗炎作用

三叶青药材具有消炎镇痛的作用，是西药无法代替的“植物抗生素”[13]。资古明[14]等研究发现小鼠腹腔注射三叶青块根提取物，对二甲苯引起小鼠肿胀有明显抑制作用；在热板法和苯醌法所致痛得模型上也均有镇痛效果。

黄真[15]等研究发现三叶青提取物能有效地抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出，抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、10％蛋清致大鼠足跖肿胀等现象，主要表现为减少醋酸致小鼠扭体次数，提高热板法小鼠痛阈值，并降低干酵母以及2，4-二硝基苯酚致大鼠发热模型的体温。从而证实三叶青药材具有较好的抗炎、镇痛作用。

1.2.3 增强免疫力作用

徐彩菊[16]探索出三叶青提取物抗肿瘤作用重要机制之一为调节机体的免疫功能，具体机制还需进一步研究。丁钢强等利用三叶青提取物对小鼠进行灌胃，研究免疫功能和细胞因子的变化，结果表明，三叶青提取物能明显提高小鼠免疫功能和TNF-α、IFN-γ指标；钟晓明[17]的研究表明，三叶青提取物对烫伤引起的肠道局部和全身免疫紊乱有纠正作用；李华美[18]等研究表明，三叶青药材具有保护实验动物的细胞免疫器官，提高免疫功能。

1.2.4 保肝作用

三叶青的总氨基酸对CCl4致小鼠急性肝损伤具有保护作用，同时三叶青所含的总氨基酸是其保肝作用的有效活性成分[19-22]。同样三叶青对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠免疫性肝损伤也具有一定的保护作用。钟晓明等实验研究表明，三叶青提取物能够明显降低CCL4致小鼠肝损伤后ALT、AST增高的现象，减轻肝细胞变性、炎症浸润以及坏死等病变，降低肝中MDA生成量。由此说明三叶青提取液对CCI4所致肝损伤确实具有一定的保护作用。

1.3 三叶青的临床应用研究

因三叶青在抗肿瘤、抗炎、保肝等多个方面所表现出的药理作用，其在临床上的研究也开始被关注[23]。

在治疗血液病及心脑血管疾病方面，用三叶青等中草药研制的复合草药治疗急性粒细胞性白血病患者l例，患者服用中药1年半后，骨髓检查显示，早幼粒细胞从化疗前骨髓早幼粒细胞24％到现在早幼粒细胞为1％。郭武进[24]等发现一种治疗再生障碍性贫血、血小板减少、骨髓增生性全血细胞减少、白血病等多种血液病的中草药物，其散剂原料中含三叶青药效。该中草药能提高巨噬细胞的吞噬功能，以及减轻骨髓微循环损伤；具有抑制病理细胞生长，增强机体免疫力等能力。黄治源[25]等发现的一种能够治疗心脑血管疾病药物中有草药三叶青的成分。本草药物具有服用方便、药效持久、临床起效快、安全无毒的特点，对中风恢复期及僵硬期都有效，适用于高血压、脑血栓、偏瘫、冠心病等心脑血管疾病方面的治疗和预防。

在治疗肝炎方面，三叶青药材民间临床用于黄疸和急性、慢性肝炎等方面，具有较好的疗效。李承栋[26]研发出一种能够用治疗慢性乙型肝炎的新药，该药是以三叶青等为原料配制而成的一种中草药复方制剂，具有抑制和清除乙肝病毒，阻断肝纤维化，保护肝细胞，调整机体免疫等作用。

在治疗感染性疾病方面，三叶青块根注射液可用于治疗急性肺炎、支气管炎、肠炎、咽喉炎、胆道感染及眼睑蜂窝组织炎等感染性疾病。另外，在治疗小儿外感高热[27]及低热咳嗽、抗艾滋病毒[28]、类风湿性关节炎、毒蛇咬伤以及一些妇科疾病方面，三叶青药效在临床方面都有较好地体现。

二 ^范文提纲

前言

三叶青简介

三叶青药用价值简介

三叶青总黄酮提取工艺简介

三叶青总黄酮的提取

实验材料与方法

实验试剂

实验仪器

2.2 实验方法

2.2.1 三叶青药材的前处理

2.2.2 三叶青总黄酮含量的测定

2.2.3 三叶青提取方法的优化

2.3 结果与讨论

2.3.1 三叶青干粉的收率

2.3.2 乙醇浓度对提取效果的影响

2.3.3 溶剂用量对提取效果的影响

2.3.4 提取时间对提取效果的影响

2.3.5 提取次数对提取效果的影响

3. 薄层色谱检测三叶青总黄酮

3.1 实验材料与方法

3.1.1 实验仪器与试剂

3.1.2 薄层色谱检测方法

3.2 结果与讨论

4. 结论

5. 参考文献

三 参考文献

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