药物代谢酶介导的荷叶药物相互作用研究_开题报告

一、文献综述

查找^范文相关文献，介绍本论题目前研究现状、研究成果等内容。

（一）研究现状

中草药既是药物也可作为食品补充剂,其应用在国际上越来越广泛。荷叶药对细胞色素P450酶及其药物转运体的诱导和抑制是介导中草药-药物相互作用和产生药物临床毒副反应的主要机制。荷叶能够通过影响药物代谢酶或转运体基因表达和功能改变其底物药物的血药浓度,可能导致临床上药物毒副反应或治疗失败的发生,产生有重要临床意义的中草药-药物相互作用。研究还发现,甘草对药物代谢酶和转运体的影响也受基因剂量控制,即符合基因剂量效应,因而具有遗传的个体差异。本文概述了近年来药物代谢相关基因介导的中草药-药物相互作用及药物基因组学临床研究的最新进展。细胞色素酶系统是机体重要的代谢酶，它参与了许多内源性和外源性物质的代谢。在药物的代谢过程中，CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP2E1和CYP2C9是最主要的亚型，其参与了市场上左右药物的代谢。当两种药物合并使用时，一种药物对另一种药物的代谢酶产生抑制或诱导作用都可能产生药物相互作用，导致产生毒性或治疗失败，增加临床治疗的风险。在临床过程中，抑制作用的危害要远大于诱导作用的危害。抑制酶的活性可能会引起血药浓度升高而导致毒性作用，有时甚至会危及生命。很多药物因发生严重的代谢性药物相互作用而被撤出市场。中药是来自大自然的天然产物，其常被认为是“安全的，无毒副作用”的药物，从而受到人们的青睐，被广泛使用。然而，近年来的研究发现多种中（草）药及其制剂也会对酶产生抑制或诱导作用，从而引起代谢性药物相互作用。这种药物间的相互作用已经引起人们的关注。因此，对一些常用中药进行潜在药物相互作用研究，以预测其可能发生的药物相互作用，是保证临床用药安全有效的重要途径，具有极其重要的意义。

（二） 研究成果

近年来，人们对中（草）药需求量逐年增加，特别是那些能用于临床治疗或是作为保健的中（草）药及其制剂，在亚洲、北美和欧洲国家的使用量大大增加⑴。据世界卫生组织的报道，在发展中国家，约的人口将中（草）药作为主要的医疗保健形式。调查发现，部分患者在使用常规药物进行治疗或预防疾病的过程中，经常会通过自我给药的方式服用某些中（草）药。研究显示，美国有约的患者在接受常规药物治疗的同时还服用中（草）药或其制剂。而对于患有慢性疾病，如心脑血管疾病、失眠、肝脏疾病、抑郁症等的患者，这一比例可能会更大。然而，在此过程中，绝大多数的患者没有告知医护人员服用中草药的情况，而大部分患者

自己对这些中（草）药的信息了解也不够详细，因此，这种自我用药给常规药物的治疗带来极大的困难。随着循证医学和转化医学的深入发展,人们对疾病发生、发展的机理,药物治疗的方法及手段都有了更深刻的认识。传统“同病同药”、“单一靶点式给药”的旧有用药模式受到了巨大挑战,转而寻求运用遗传药理学及代谢组学的理论平衡制约复杂慢性疾病发生的多个靶标的失衡,遗传个体化给药方式治疗疾病[1-2]。因此,中草药这个成分复杂,作用靶点多样,对慢性疾病具有肯定的治疗优势的药物被人们寄予了厚望。但是,刺五加、茵栀黄、双黄连及其鱼腥草注射液等一系列药物严重不良反应事件的出现提醒我们,临床上数以千万计的患者面临着中草药相关的药物毒副反应的风险之中[3]。遗传药理学和药物基因组学的研究进展表明,基因介导的遗传因素也是导致中草药相关的药物不良反应的重要原因之一。因此,阐明中草药-药物相互作用的机理,明确其作用机制,掌握中草药用药过程的产生遗传个体差异的规律,对于指导临床合理用药,有效避免中草药-药物合并用药过程所产生的不良反应,达到有益治疗效果具有重要的临床实践意义。

大量研究表明，中草药也并非真正的无毒副作用，其药效成分在体内代谢酶的作用下发生一系列的代谢过程或生物转化，使其化学结构发生改变，产生新的生理活性物质或代谢产物，并发挥药理作用或毒理作用。由于部分化学成分在体内的代谢过程中可能会转化成毒性代谢产物，与体内的重要代谢酶系、转运体、受体、核酸等生物大分子结合而导致许多不良反应。在这个代谢转化过程中，药物及其代谢产物同时也可能会对代谢酶产生抑制或诱导作用，或影响转运体的功能，引起合用药物的药效学或药代动力学行为发生改变，产生药物相互作用甚至是药物不良反应。

检测方法：采用Caco-2细胞模型研究荷叶乙醇提取物、总黄酮和总生物碱对糖蛋白（P-gp）

功能的影响。结果表明，荷叶乙醇提取物和总生物碱对P-gp存在浓度依赖性的抑制作用，在浓度为100Ug/mL时，Caco-2细胞内的荧光强度明显增加，即Caco-2细胞对Rho-123的摄取量增加，有显著的抑制作用(p＜0.05)荷叶总黄酮对P-gp有一定的抑制作用，但与空白对照组相比较，无显著差异P〉0.05。

采用右美沙芬和美托洛尔作为CYP2D6酶的探针底物，以LC-MS/MS技术为分析手段，研究荷叶总生物碱对这两种探针底物在体内的代谢产物右菲烷和α-羟基美托洛尔药代动力学的影响；给大鼠连续灌胃总生物碱（50mg/kg）7天，并于末次给药后2或12 h时间点给大鼠静脉注射右美沙芬（5mg/kg）或美托洛尔(10mg/ml)，观察其代谢产物血药浓度的变化。并通过蛋白质印迹法(western blot)研究总生物碱对大鼠体内CYP2D6酶蛋白表达水平的影响。结果表明，总生物碱能显著降低右菲烷和a-轻基美托洛尔的血药浓度。在末次给总生物碱后2或12h时间点给大鼠静脉注射右美沙芬或美托洛尔，总生物碱使右菲烷的AUCcall从167.27h-ng/rnL分别下降到43.13 hwg/mL( P<0.01)(给生物碱后2h时间点)和62.25 hwg/mL( P<O.OS )(给生物碱后12h时间点);使a-经基美托洛尔的AUC},1从347.68 h-ng/mL下降到223.24 h}ng/mL ( P<O.OS )(给生物碱后12h时间点)。连续给予大鼠总生物碱7天后，大鼠体内CYP2D6酶蛋白的表达水平并无明显改变。上述研究结果提示，总生物碱在体内亦对大鼠CYP2D6酶有明显的抑制作用，与体外结果相吻合;但这种抑制作用并不影响CYP2D6蛋白的表达水平。

采用LC-MSIMS分析方法，研究给大鼠灌胃荷叶总黄酮( 50 mg/kg)或总生物碱(50 mg/kg)后的体内药物成分，以及大鼠静脉注射荷叶总生物碱(50 mg/kg )

后，其主要生物碱成分荷叶碱、N一去甲荷叶碱和2-轻基一1一甲氧基阿朴啡在大鼠组织中的分布情况。结果从大鼠血液和尿液中鉴定出37个黄酮成分，主要包括原型化合物和这些化合物与葡萄糖醛酸和硫酸等结合而形成的代谢产物，表明荷叶黄酮成分在体内的代谢途径主要为II相代谢;从大鼠血液和尿液中鉴定出17个生物碱成分，包括生物碱原型化合物及其经氧化、甲基化等的代谢产物，和葡萄糖醛酸和硫酸等的结合物，表明荷叶生物碱在体内代谢广泛，其代谢途径包括I相和II相代谢。给大鼠静脉注射总生物碱后，三个主要生物碱成分荷叶碱、N一去甲荷叶碱和2-轻基一1一甲氧基阿朴啡能迅速(( 5 min )分布到各组织，其中在肝脏、肺、脾脏和肾脏等组织中具有较高的浓度，并在体内维持较长时间。通过上述研究结果可初步测荷叶对P450酶活性的抑制与其在体内的药物成分及其组织分布情况有关。

   1.以奥美拉哇、右美沙芬、翠丸酮、氯哇沙宗和甲苯磺丁脉分别作为CYP2C19,

CYP2D6, CYP3A4, CYP2E1、CYP2C9的探针底物，将这5个探针底物与人肝微粒体共同孵育，并利用LC-MS/MS分析技术检测代谢产物的生成量，建立同时测定人

肝微粒体P450酶5种亚型活性的cocktail探针底物体外评价方法;并运用所建立的方法研究12味常用中药(荷叶、酸枣仁、决明子、五味子、山植、构祀子、莲子心、人参、菊花、黄精、获菩和金银花)对人肝微粒体P450同工酶活性的影响。研究结果显示，所建立的方法具有灵敏度高、特异性强、重现性好和准确度高的优点，能满足体外代谢性药物相互作用研究的要求。12味中药的水提取物对P450同工酶的抑制作用较弱或没有抑制作用;而乙醇提取物则有不同程度的抑制作用(除构祀子外)，而且这种抑制作用存在浓度依赖性。其中荷叶乙醇提取物对CYP2C19, CYP2D6,CYP3A4, CYP2E1和CYP2C9半数抑制浓度ICS。值分别为77.38, 12.05, 98.01, 61.43和83.46 wg/mL;菊花乙醇提取物对CYP2C9活性抑制的ICS。值为45.25 }g/mL;五味子乙醇提取物对CYP3A4和CYP2C19活性抑制的ICso值分别为47.24和64.42 }g/mL .上述研究结果提示，日常服用这些中药时，尤其是在长期服用这些中药经乙醇提取后制备所得的制剂时，应注意其潜在的药物相互作用。

    采用cocktail探针底物法分别研究荷叶总黄酮和总生物碱及其主要化学成分

对人肝微粒体P450酶各亚型活性的影响。结果表明荷叶总黄酮对肝微粒体P450酶活性的抑制作用相对较弱，其ICS。值均在100 }g/mL左右;总生物碱对P450酶活性的抑制作用则较强，其对CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4, CYP2E1和CYP2C9的半数抑制浓度ICS。值分别为40.79, 0.96, 44.87, 63.84和52.58 },g/mL，其中对CYP2D6同工酶的抑制作用最强。总生物碱中的主要成分荷叶碱、N一去甲荷叶碱和2-轻基一1-甲氧基阿朴啡通过竞争性抑制方式抑制CYP2D6酶的活性，其抑制常数K;值分别为1.88 , 2.34和1.56 }M。但这二者对CYP2D6酶活性的抑制不存在时间依赖性和NADPH依赖性的不可逆抑制作用。

二、^范文提纲

摘要

Abstract

前言 

1.1代谢性药物相互作用的研究进展

1.1.1P450酶的命名

1.1.2参与药物代谢的主要P450酶亚型

1.1.3代谢性药物相互作用及其危害

1.1.4代谢性药物相互作用的研究方法

1.1.5细胞色素P450酶的抑制和诱导作用研究

1.2荷叶的研究进展

1.2.1荷叶的化学成分

1.2.2荷叶的药理活性

1.2.3荷叶的药代动力学研究

常用中草药对P450酶活性影响的研究

 2.1材料

2.1.1仪器

2.1.2药品与试剂

2.2方法

2.2.1溶液配制

2.2.2肝微粒体酶体外孵育反应体系

2.2.3代谢产物的LC-MS/MS分析方法

2.2.4方法学验证

2.2.5中草药提取物对P450酶活性影响

2.3结果

2.3.1方法学特异性

2.3.2线性范围与LLOQ和LOD

2.3.3精密度和准确度

2.3.4稳定性

2.3.5机制效应

2.3.6阳性抑制剂对P450酶活性的影响

2.3.7中草药提取物对P450酶活性的影响

第三章  荷叶潜在药物相互作用研究

3.1荷叶化学成分分析

3.2荷叶活性部位及其主要化合物对酶的影响

3.3荷叶对糖蛋白活性的影响

结论与展望

参考文献

致谢

附录

三、参考文献

[1]李芹,王睿.细胞色素P4502D6基因多态性和药物相互作用[J].中国临床药理学与治疗学;2006年04期

[2]中草药杂志社4种期刊为允许刊载处方药广告的医药专业媒体[J];药物评价研究;2011年02期

[3]中草药杂志社4种期刊为允许刊载处方药广告的医药专业媒体[J];药物评价研究;2011年04期

[4]欢迎订阅Chinese Herbal Medicines(CHM,中草药英文版)[J];药物评价研究;2011年04期

[5]片剂(一)[J];广西医学;1973年03期

[6]顾东蕾;;Structure Activity Relationships(SAR)of Anticancer Chinese Meclicinal[J];药学进展;1988年04期

[7]“第六届中药新药研究与开发信息交流会暨《中草药》杂志第十届编委会”征文通知[J];中国临床药学杂志;2007年03期

[8]“第六届中药新药研究与开发信息交流会暨《中草药》杂志第十届编委会”征文通知[J];药物分析杂志;2007年05期

[9]“第六届中药新药研究与开发信息交流会暨《中草药》杂志第十届编委会”征文通知[J];药物分析杂志;2007年06期