葛根芩连片的含量测定研究进展(三)

1.标准溶液配制

用十万分之一分析天平精密称取在120℃下干燥至恒重的芦丁10mg置于50ml容量瓶中，于水浴上微热溶解，放冷，加甲醇至刻度，混匀即得（每1ml含芦丁0.2mg）

2.标准曲线的制备

 精密吸收标准溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0毫升置于25毫升容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1毫升混合，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1.0毫升，摇匀，放置6.0分钟，加4%氢氧化钠溶液10.0毫升，加水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。分钟，波长500纳米，将第一个烧瓶清空。测量吸光度，绘制标准曲线。回归方程A=2.1191×10-3+0.05639C，r=0.9987。 

3.样品的测定 

将葛根芩连片 （去糖衣）研成粉末，过80目筛，得细粉，于60℃干燥 4h，精密称取细粉适量（6-7g）置索氏提取器中加入60ml乙醚，回流至无色 （除去亲脂性物质），放冷，弃去乙醚液，加甲醇60ml，加热回流提取至提取液无色。将甲醇提取液置100ml容量瓶中，用少量甲醇洗涤残渣，将洗涤液汇入容量瓶3次，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸收上清液10毫升置于另一个100毫升容量瓶中，用水稀释至刻度，混合。精密吸收稀释剂3.0毫升于25毫升容量瓶中，根据标准曲线绘制项下加5%亚硝酸钠1.0毫升进行操作，测定吸光度。根据吸光度，从标准曲线计算出芦丁标准溶液的当量浓度，总黄酮含量按下式计算。结果如表1所示。 

公式中：C—从标准曲线求出样品浓度（mg/100ml）

W—样品的重量（g）

表1葛根芩连片总黄酮含量

样品批号 取样量（g） 测得吸收度※（A） 样品浓度（mg/100ml） 总黄酮含量（%）

970201 7.7809 0.208 3.65 3.91

970202 7.5114 0.194 3.40 3.77

970303 7.0102 0.186 3.26 3.88

970304 7.0046 0.238 4.18 4.97

970405 7.2564 0.213 3.74 4.30

970406 6.1120 0.240 4.22 5.75

970407 6.1241 0.225 3.95 5.73

970508 6.7230 0.210 3.69 4.57

平均 4.61

※三次测定平均值

4.加样回收实验 

按样品中总黄酮测定项下取  测定操作，测定结果见表2。

按2.2.3项样品，精密测定，并加芦丁标准品适量

表2 加样回收试验结果

编号 样品重（g） 样品中原有总黄酮含量（g） 加入芦丁量（g） 测得总黄酮量（g） 回收率（%）

1 6.5503 0.3020 0.06632 0.3675 98.76

2 6.8632 0.3164 0.07828 0.3920 96.58

3 6.8927 0.3178 0.05930 0.3756 97.47

4 6.9876 0.3221 0.05642 0.3757 95.00

平均 96.95

CV 1.63%

四、结论

 本实验采用相同的方法，在相同的薄层条件下，用相同的阳、阴对照液对葛根芩连片进行了4个样品的检测，并加入葛根素、黄芩甙、盐酸小檗碱、甘草酸等主要有效成分对标准品进行了控制。结果表明，所检测的成分不受其他药物干扰，具有很强的特异性。 

 葛根、黄芩、甘草中均含有黄酮类化合物，故以总黄酮含量作为葛根片的质量指标。每批样品含量不同，从3.77%到5.75%，平均4.61%，平均回收率96.95%。在大规模生产中，由于原料来源的不同，导致来源的不同，品种的不同，再加上工艺制造过程的不同等，都会导致测定结果的误差。因此，作者认为总黄酮可以控制在一定范围内，作为质量的基础之一。 

方中生物碱成分，而生物碱具有抗菌消炎作用。因此，是否把生物碱作为葛根芩连片的质量控制指标，有待进一步研究。

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