冬凌草中有效成分冬凌草甲素含量测定开题报告

文献综述

研究现状

（一）冬凌草甲素的功效及临床应用

冬凌草为唇形科植物碎米桠Rabdosiarubescens (Hemsl .)Hara .的干燥地上部分[1]。长期以来中国、韩国和日本等地明见广泛将冬凌草用于抗炎、抗菌和治疗肿瘤。20世界70年代研究证实了冬凌草甲素的药用抗肿瘤特性，并因此得到广泛的关注。我国是该属植物资源最丰富的国家。1977年，冬凌草被收入《中华人民共和国药典》[2]。今年来，由于冬凌草甲素的抗肿瘤功效明显，相关研究越来越广泛和深入。例如：冬凌草甲素可通过下调STAT3-HK-Ⅱ通路诱导HepG2细胞凋亡。HepG2细胞为肝脏肿瘤提取细胞，STAT3和HK-Ⅱ基因在此细胞中呈过表达或高水平表达，因此抑制STAT3和（或）HK-Ⅱ的表达及活性，可抑制HepG2细胞生长，从达到治疗肝癌的目的。研究证明，冬凌草甲素可通过抑制STAT3的表达活性来抑制HK-Ⅱ的表达及活性，从而抑制HepG2细胞生长，促进HepG2细胞凋亡[14]。临床试验表明，冬凌草甲素对食管癌、结肠癌、肝癌等液有一定疗效，还可与常用联合化疗药物联合使用，如PN（平阳霉素+，消瘤芥）、顺铂等，有增效作用。另外，冬凌草对化脓性扁桃体炎，急、慢性咽喉炎及慢性气管炎等也有良好的功效。河南不少医药企业已在生产销售冬凌草糖浆、冬凌草片剂，用于肿瘤治疗和咽喉炎、扁桃体炎的治疗[15]。

（二）冬凌草甲素提取工艺

随着冬凌草的问世和冬凌草甲素功效的了解，冬凌草甲素的提取工艺也越来越受关注。冬凌草提取的传统方法有冷浸法、渗滤法、回流法和破碎法等[3]，但冷浸法和渗滤法提取时间长、溶剂用量大、操作费时；回流法提取效率虽较高，但不宜用于受热易破坏的药材，且操作麻烦，每次处理样品量少，且尚无该提取设备问市。冬凌草甲素含量测定的分析方法有紫外分光光度法[4] 、薄层扫描法[5] 、HPLC[6] 、HPCE[7] 、UPLC[8]等。其中比色法和薄层扫描法存在定量不准确的缺点；HPCE法虽然快速、试剂用量少且柱不易受污染而优于HPLC，但是进样精度较HPLC低，存在重现性较差、线性范围窄和灵敏度较低等缺陷。目前HPLC法是较为常用的冬凌草甲素的测定方法，采用HPLC法测定其抗炎有效部位中冬凌草甲素的含量，此方法克服了常规提取方法的不足，提取率较高。但是，提取之前用不同的溶剂浸泡冬凌草，对冬凌草甲素含量的测定影响较大。早期采取的方法是乙醚室温浸泡[ 9] , 这种方法得到的提取液杂质较少, 色素相对较少, 方便样品的后续分离, 缺点是乙醚极易挥发和易燃, 很不安全, 成本也较高。后来采取体积分数为70 %丙酮提取的方法, 该方法的主要特点是在浓缩的过程中, 大色素变成沉淀, 可过滤除去, 使后续分离易于进行[ 10] 。目前广泛使用乙醇回流或者冷浸[ 3] 。也有使用甲醇的, 优点是提取完全, 缺点是毒性大。乙醇冷浸法耗能较低, 有助于保护热敏性化合物, 但是为了达到高提取率, 提取时间通常长达数天。不同提取时间对提取量的影响, 30min 以上的提取率变化不大, 30 min 以内提取率随提取时间延长而增大。究其原因, 冬凌草甲素多含在叶中, 而冬凌草叶很薄, 30 min 热乙醇浸取已经将大部分甲素提取出来，因此乙醇浸泡提取30 min 得到的冬凌草浸膏是适合实验室大规模提取冬凌草甲素的方法[11]。

（三）冬凌草原材料对冬凌草甲素含量的影响

从上述试验证明，冬凌草冬凌草甲素含量, 茎中含甲素的量较低, 仅相当于叶中含甲素量的1/20 ,因此在冬凌草入药时，控制药材中叶的量或者仅用叶作药用[12]。除此之外采收时间对冬凌草中冬凌草甲素的含量也有较大的差别。

4～5 月份虽冬凌草甲素的含量很高，其他月份冬凌草甲素的含量相对较低，但4～5正是冬凌草的出苗期，生物量很低, 不适宜采收。入秋后冬凌草陆续进入生殖生长,虽生物量较高, 但药材冬凌草甲素含量明显降低, 也不适宜采收。综合对冬凌草药材质量和产量的评价,应该把冬凌草的最佳采收期确定在其开花前[13]。

研究目的与意义

通过研究冬凌草甲素的含量，了解提取工艺、采收时间和冬凌草的不同部位对冬凌草甲素的影响，从而为冬凌草甲素的生产加工提供依据。

^范文提纲

一绪论

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二材料与仪器

（一）试剂与材料

（二）仪器

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三方法与结果

（一）试剂与材料

（二）仪器

（三）色谱条件

（四）对照品溶液制备

（五）供试品溶液制备

（六）标准曲线制备

（七）精密度实验

（八）重复性实验

（九）稳定性实验

（十）回收率实验

（十一）冬凌草甲素提取

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四参考文献

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五致谢

参考文献

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