阿糖胞苷代谢关键酶活性与药物血浓度关系研究_开题报告

一 文献综述

治疗需要分析

阿糖胞苷（Ara-C）是治疗儿童急性白血病（AL）的关键化疗药物之一，杨蓉等[1]在我国率先开展临床实验，大剂量阿糖胞苷（HD-AraC）是目前治疗儿童难治型、高危型ALL和晚期非霍奇金淋巴瘤（NHL）的有效疗法。李威等[2]通过药代动力学分析认为，HD-Ara可避免人核苷平衡载体（hENT1）的限制，明显提高细胞内药物浓度，增强抗肿瘤效应。Ara-C进入体内之后，在脱氧胞苷激酶（DCK）的磷酸化作用下生成活性产物Ara-C-CTP，实现其细胞毒作用；同时，又在胞苷脱氨酶（CDA）的作用下脱氨为相对无活性的产物Ara-U而失效。

国内外现状分析

国内外对Ara-C 代谢关键酶DCK与CDA的研究主要集中在成人患者，儿童患者DCK与CDA 酶活性与临床疗效的关系罕见报道。谢小恬等[3]通过研究32例急性白血病及恶性淋巴瘤患儿骨髓单个核细胞内DCK与CDA活性的测定发现：初发患儿DCK 活性高于复发患儿，CDA活性低于复发患儿，在 ALL、AML、NHL3种疾病的初发患儿中DCK与CDA 酶活性未见显著性差异；未发现酶活性与患儿年龄、性别之间的相关性，初步认为DCK与CDA酶活性与Ara-C的疗效相关，与血液病类型及患儿性别、年龄无相关性。

基本原理

阿糖胞苷对于关键酶的作用机理有多种形式，而李威等[4]人通过实验认为，Ara-C进人体内后经过多次磷酸化转化Aar-CTP，Aar-CTP为Aar-C的活性形式，同时RAa-C可在CDA的脱氨作用下迅速降解，成为相对无活性的RAa-C，可见，rAa-C在体内同时接受活化和降解两条代谢途径的作用，DCK和CDA为上述代谢途径中的关键酶。因此，理论上DCK和CDA的酶活性表达强弱，可能与RAa-C的血药浓度高低密切相关，并进而对远期疗效产生影响。

在阿糖胞苷的作用机理方面，酶活性表达表现出来的与体内Aar-C代谢的关系是比较常见且重要的一类形式，万海霞等[5]人通过研究其发生机理认为，以往有关DCK、CDA与Aar-C疗效的关系研究，均集中于DCK和CDA的基因表达，且研究对象为成人白血病。理论上，酶活性表达更能直接反映代谢关键酶与体内Aar-C代谢的关系，以及与rAa-C临床效应的相关性。但是，目前罕见有此方面的相关报道。万海霞等[6]通过分析我国情况，提出前期对儿童恶性血液肿瘤，DCK、CDA酶活性与Aar-c疗效密切相关，安富贵等[7]人研究表明，难治耐药的病例可检测到DCK活性的下降和(或)CDA活性的增高。

学者们的最新研究

DCK、CDA酶活性与血浆Aar-C、Aar-U浓度的活性研究室目前国内，国际上研究的主要方向，杨国华等[8]人通过测定DCK、CDA酶活性与血浆Aar-C、Aar-U浓度并分析两者之间的相关性，发现CDA酶活性表达强弱将明显影响Aar-C、Aar-U的血浆峰浓度。即CDA酶活性高的患儿，Ara-u血浆浓度高，Aar-C血浆浓度低；CDA酶活性低的患儿，Aar-U血浆浓度低，rAa-C血浆浓度相对高。周敏等[9]提出，如果CDA酶活性高，Aar-C在进人体内后即可在高活性CDA酶的作用下大量转化为Aar-U而失活，故血浆中rAa-U浓度高，而rAa-C血浓度降低。反之，如CDA酶活性低，则Aar-C血浆浓度能够达到相对较高的水平。同时，研究结果也显示，DCK酶活性与rAa-C、rAa-U的血浆峰浓度无相关性。而马菁等[10]人通过研究认为，DCK主要存在于细胞内，其代谢最终产物为rAa-CTP，故DCK的酶活性强弱对于rAa-C、rAa-U的血浆浓度无直接影响，其疗效取决于细胞内rAa-CTP的生成量和速率。

在儿童急性白血病治疗上，阿糖胞苷的药用价值得到了明显的体现，其中孟冬梅等[11]学者分析了儿童急性白血病不同阿糖胞苷化疗的药动学原理后提出，HD-Aar-C可通过显著提升药物血浓度，增强其抗肿瘤效应，提高儿童难治型恶性血液肿瘤的远期疗效。HD-Aar-C治疗时的血浆Aar-C和Ara-U峰浓度分别为常规剂量的20倍和50倍。然而，由于Aar-C在体内同时受到DCK的活化和CDA的降解作用，因此采用相同剂量HD-Aar-C治疗，对于体内代谢关键酶存在活性差异的不同患儿个体，药物血浓度并不-致，其中CDA的影响尤为显著。提出检测CDA活性表达，可能为适当调整HD-Aar-C药物剂量，使之达到较为理想的药物血浓度，而成为开展科学的个体化治疗的有效参考指标之-。

从患儿化疗前后CDA值的变化来预测疗效也是最近几年通过对患者细胞DCK、CDA酶活性研究来评价阿糖胞苷的临床价值的主要方法之一，杨蓉等[1]通过实验未发现年龄与性别对患儿细胞内DCK、CDA酶活性的影响，提示在儿童恶性肿瘤中年龄与性别与临床疗效及耐药性无相关性，对10例患儿化疗前后DCK、CDA酶活性进行了比较发现，DCK、CDA酶活性在化疗前后无统计学差异说明，DCK、CDA酶活性不受Aar-C治疗的诱导，是今后继续开展有关，体内代谢与临床治疗的研究及开展个体化治疗的有利因素，但在动态观察中发现完全缓解的患儿未治疗前CDA活性较高，处于完全缓解状态时CDA活性降低，而对于未缓解的1例复发患儿，治疗后活性反较治疗前升高，因此，有可能从患儿化疗前后CDA值的变化来预测疗效，当然由于病例数较少，实验结论有待于扩大样本后进一步证实。

以往有关DCK、CDA与Aar-C疗效的关系研究，均集中于DCK和CDA的基因表达，且研究对象为成人白血病。理论上，酶活性表达更能直接反映代谢关键酶与体内Aar-C代谢的关系，以及与rAa-C临床效应的相关性。但是，目前罕见有此方面的相关报道。我科前期对儿童恶性血液肿瘤的研究表明，DCK、CDA酶活性与Aar-C疗效密切相关，其中难治耐药的病例可检测到DCK活性的下降和(或) CDA活性的增高。

通过测定DCK、CDA酶活性与血浆Aar-C、Ara-U浓度并分析两者之间的相关性，发现CDA酶活性表达强弱将明显影响rAa-C、Ara-U的血浆峰浓度。即CDA酶活性高的患儿，Ara-U血浆浓度高， Aar-C血浆浓度低；CDA酶活性低的患儿，Ara-U血浆浓度低，rAa-C血浆浓度相对高。说明，如果CDA酶活性高，rAa-C在进人体内后即可在高活性CDA酶的作用下大量转化为Ara-U而失活，故血浆中Ara-U浓度高，而rAa-C血浓度降低。反之，如DCK酶活性低，则Aar-C血浆浓度能够达到相对较高的水平。同时，研究结果也显示， DCK酶活性与rAa-C、Ara-U的血浆峰浓度无相关性。由于DCK主要存在于细胞内，其代谢最终产物为rAa-CTP，故DCK的酶活性强弱对于rAa-C、Ara-U的血浆浓度无直接影响，其疗效取决于细胞内rAa-CTP的生成量和速率。因此，本研究以体内实验数据验证了前述有关rAa-C体内代谢途径的理论。

二、^范文提纲

1 资料与方法

1.1一般资料

1.2 DCK和CDA酶活性测定

1.1.1 骨髓单个核细胞的抽取

1.1.2 细胞内酶原的提取

1.1.3 DCK酶的活性测定 

1.1.4 CDA酶的活性测定

1.3 血浆rAa-C、rAa-U峰浓度测定

1.3.1 化疗方案

1.3.2 血药浓度检测

1.4 统计学分析

2 结果

2.1. DCK和CDA酶活性测定

2.2血浆Ara-C、Ara-U峰浓度测定

2.3 DCK、CDA酶活性与血浆Aar-C、Aar-U峰浓度间的关系

2.3.1 DCK酶活性与Aar-C、Aar-U血浆峰浓度的关系

2.3.2 CDA酶活性与血浆Aar-C、Aar-U峰浓度间的关系

3 讨论

三、参考文献

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