黄芪及其制剂中黄芪甲苷含量测定方法研究进展开题报告

黄芪（Radix Astragali）又名绵芪，多年生草本植物。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。但表实邪盛，气滞湿阻，食积停滞，痈疽初起或溃后热毒尚盛等实证，以及阴虚阳亢者，均须禁服。其含有多糖、总皂苷、黄酮、氨基酸、微量元素等。近代药理研究证明，黄芪多糖和黄芪总皂苷为其中的主要成分，有着广泛的药理作用。其中黄芪中所含的黄芪甲苷是作为含量测定指标性成分载入药典。因此，测定黄芪甲苷的含量是评价黄芪及其制剂质量的重要指标，本文综述近10年的研究进展。

1 光谱法

主要采用光谱法中的可见分光光度法，即光电比色法。该法简便快速，灵敏。 主要利用黄芪甲苷与显色剂发生显色反应，变成有色物质，使之能用可见分光光度法测定。提高了测定的灵敏度和选择性。常用的显色剂有香草醛-硫酸、香草醛-冰醋酸、香草醛-高氯酸、硫酸-乙醇。

刘冰等应用傅立叶变换近红外光谱仪透射光谱技术对黄芪精口服液中黄芪多糖（APS）和黄芪甲苷(AGS)的含量进行检测分析，采用偏最小二乘回归法（PLS）建立了黄芪精口服液中APS和AGS含量近红外数学校正模型。通过内部交叉验证，确定了模型的最佳变量数，得到了建立模型的最佳参数，并通过预测集对模型进行了外部验证。黄芪多糖的相关系数达到0.9797，交叉验证均方差（RMSECV）为0.153，预测集均方差（RMSEP）为0.178；AGS的相关系数达到0.9412、RMSECV为0.0365，RM-SEP为0.0458。通过对模型进行ｔ检验，在给定显著性水平为0.05的条件下，其测定结果与标准方法的测定结果对比，两者无显著性差异。实验结果表明，近红外光谱法可以快速、准确测定黄芪多糖和黄芪甲苷的含量[1]。

2 薄层扫描法

该法具有快速、灵敏、高选择、显色方便的特点。多采用双波长扫描法 ,能消除有机成分的干扰及操作误差，使测定的灵敏度和精确度显著提高。多用甲醇、正丁醇提取样品，以不同比例的氯仿-甲醇-水或其它为展开剂[2,3]在硅胶薄层板上展开，用硫酸乙醇与黄芪甲苷发生显色反应后进行扫描测定。

王春娥等采用薄层扫描法对复方黄芪片中黄芪甲苷进行含量测定。仪器:CS-930 薄层色谱仪（日本岛津公司）； 定量毛细管（美国，Drummond 公司）； PBQ-Ⅱ型薄层自动铺板器（重庆南岸新力实验电器厂）。试药:硅胶G（青岛海洋化工厂）；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号0781-200109，供含量测定用）；化学试剂均为分析纯。检测波长为530nm，展开剂为氯仿-甲醇-水（30∶10∶1）；显色剂为10%硫酸乙醇液。黄芪甲苷在1023.2～8185.6ng范围内线性关系良好（r=0.9994），平均回收率为97.41%，RSD为0.64%。实验表明该方法简便，专属性强，稳定性好，可作为复方黄芪片黄芪甲苷含量测定的质量控制标准[4]。

周嵩煜等采用薄层色谱法对补血益气口服液中的黄芪、红参和制何首乌进行定性鉴别，采用薄层扫描法测定该口服液中黄芪甲苷的含量。吸附剂为硅胶 G-0.1%CMC-Na薄层板；展开剂：[正丁醇-醋酸乙酯-水（4∶1∶5）的上层溶液]-甲醇-正丁醇（10∶1∶2），氨蒸气饱和；显色剂：10% 硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑点清晰。取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用透明胶条封固。用日本岛津CS-930型双波长薄层扫描仪进行双波长反射法锯齿扫描，测定波长：λs=530nm，参比波长：λR=700nm，线性化参数 SX=3，所采用的光束为0.4mm×0.4mm [5]。

3 高效液相色谱法

多用于黄芪药材[6]及其制剂中黄芪甲苷[7]的测定。该法兼具分离和分析功能，较薄层色谱法分离效率更高，测定结果更精确。且流动相可选择性范围宽，色谱柱可反复使用，逐渐成为一种首选的分离分析方法。样品的处理多为溶剂如正丁醇直接提取，用甲醇定容进样。色谱柱多采用C18柱，流动相多为乙腈-水或甲醇-水。检测波长紫外区域的203 nm左右。

郭洪祝等采用HPLC法测定了制剂中黄芪甲苷的含量。美国TSP P100 泵，UV100紫外检测器，ANASTAR色谱工作站。黄芪甲苷对照品( 含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号0781-9807)。乙腈为HPLC用(美国Fisher)，其他试剂均为分析纯。胰复康胶囊为北京同仁堂制药三厂研制(批号980102, 980103, 980104)。色谱柱Inertsil ODS-3( 250 mm id×4. 6 mm, 5μm), Zorbax ODS( 250 mm id×4.6 mm , 5μm), 流动相乙腈-水( 1∶2) , 柱温室温 ,检测波长 200 nm , 流速1. 0 ml/min，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算为4000。制剂中黄芪甲苷的含量平均为0. 0443mg/粒。实验表明HPLC法可以用于复方制剂中黄芪甲苷的含量测定[8]。

4高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD法)

蒸发光散射检测原理是使流动相溶剂喷雾汽化，进入加热管后溶剂挥发； 被分析检测的物质颗粒经镭射光产生散射，散射光由光电倍增管收集得到响应， 光散射检测器的响应大小决定由被分析物质的颗粒的数量和大小，而不受流动相溶剂的干扰；不要求被检测组分有特定的化学结构。

张娜娜等采用高效液相色谱法（HPLC），仪器:Agilent 1200 高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；Alltech2000ES 蒸发光散射检测器［美国奥泰科技（中国）有限公司］；Sartorius BS 124S 电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。药品与试剂:黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110781-200613）；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水（自制）；其余试剂为分析纯；肺痨灵合剂样品及阴性样品（丽水市中医院制剂室自制，批号：20130201，20130205，20130305，20130309，20130401，20130404，20130502，20130507，20130604，20130605）。色谱柱为Agilent XDB C18 柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流动相为乙腈-水（33：67），流速为1.0 mL/min，进样量为10μL。ELSD 参数：漂移管温度为 101 ℃，氮气流速为2.7 L/min。黄芪甲苷线性范围是1.326～9.282 μg，r 为 0.9981，平均加样回收率为98.20%，RSD为0.88%。实验表明HPLC-ELSD法灵敏、简便，准确，重现性好，可用于肺痨灵合剂的定量分析与质量控制[9]。

葛德洲等采用色谱柱用Zorbax Eclipse XDB-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈－水(32∶68)，流速为1.0 mL/ min。Waters e2695 型高效液相色谱仪( 美国Waters公司) ; 2424蒸发光散射检测器(美国Waters公司) ; Empower 化学工作站; SartoriusCP225D电子天平(德国Sartorius公司，感量0.01mg); SartoriusBS210S电子天平(德国Sartorius公司，感量0.1mg)。黄芪甲苷对照品( 中国药品生物制品检定所提供，批号为110781－200613) ;乙腈(色谱纯)，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯; 甜梦胶囊(烟台荣昌制药股份有限公司，批号为 120503，120508，120610) 。黄芪甲苷进样量的线性范围0.2304～4.608μg(r=0.9997)，平均回收率为98.15%，RSD为1.46% (n=6)。该方法用于测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量专属性强、操作简便[10]。

综上所述，对黄芪甲苷的提取及分析方法很多，但大多数复方制剂由于成分复杂，干扰严重，HPLC法和TLCS法因操作简单、快速、灵敏度高、重现性好而优于其他方法。近年来，随着新型检测器如ELSD等的不断出现，使原本无紫外吸收的黄芪甲苷也得以很好的分离；而将色谱与质谱联用(HPLC-MS)，化学衍生化与荧光相结合，则各取所长，能同时对成分复杂的样品进行定性定量分析。

参考文献：

[1] 刘冰，刘振尧，朱乾华，等. 近红外光谱法同时测定黄芪精口服液中黄芪多糖和黄芪甲苷的含量[J]. 分析科学学报，2011,27（2）：195-198.

[2 ] 俞明霞，姚仲青，江亚栋. 黄芪提取液醇沉前后有效成分的含量比较分析[J]. 时珍国药研究 , 1995, 6( 2)∶ 19-20.

[3 ] 刘金旗 ,时文霞 ,刘劲松 ,等 .薄层扫描法测定健脑精喷雾剂中黄芪甲苷的含量[ J].中药材, 1996, 19( 10)∶529-530.

[4] 王春娥，李桃. 复方黄芪片中黄芪甲苷含量测定方法研究[J]. 国际医药卫生导报,2005，11(8):78-80.

[5] 周嵩煜,黄继军.补血益气口服液定性定量方法的研究[J].中国实验方剂学杂志,2003,9(2):13-15.

[6 ] 原田正敏. 日本常用生药的定量方法-黄芪[J]. 国外医药, 植物药分册,  1990, 5( 15)∶201.

[7] 付铁军, 李伯刚, 及元乔, 等. 高效液相色谱法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量[J]. 天然产物研究与开发, 1997, 9( 4)∶53.

[8] 郭洪祝，刘晓峰. 高效液相色谱法测定胰复康胶囊中黄芪甲苷含量[J]. 中国中药杂志，2000,25（10）:609-611.

[9] 张娜娜，徐文峥，林超，等. HPLC-ELSD 法测定肺痨灵合剂中黄芪甲苷的含量[ J]. 山东中医药大学学报,2015，39(1):86-90.

[10] 葛德洲, 邓祖磊. 高效液相色谱-蒸发光散射法测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量[J].中国药业，2015，24（5）：31-32.

二、^范文提纲

1.1常用提取纯化方法

1.1.1超滤法

1.1.2高速离心法

1.1.3回流法

1.1.4水提法

1.1.5超声提取法

1.1.6水提醇沉法

2测定方法

2.1高效液相色谱法(HPLC法)

2.2薄层扫描法（TLCS法）

2.3比色法

2.4荧光法

2.5高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD法)

3结语

三、参考文献

[1] 沈小玲. 含黄芪制剂中黄芪甲苷的含量测定[J].科技创新导报，2015，（2）36-37.

[2] 刘和平，彭招华，张润容，等. 黄芪药材中黄芪甲苷UPLC-ELSD含量测定方法的优化[J]. 中国实验方剂学杂志，2015,21（5）：92-94.

[3] 刘君, 袁媛, 姜泓. ELSD-HPLC法测定益正片中黄芪甲苷的含量[J]. 中华中医药学刊，2007, 25(7):1278-1279.

[4] 段立军, 孙博航. 黄芪甲苷的研究进展[J]. 沈阳药科大学学报，2011,28（5）：410-416.

[5] 赵春燕. 高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定芪黄胶囊中黄芪甲苷含量研究[J]. 亚太传统医药，2014,10（21）：21-22.

[6] 蒋红艳，杨元娟，何静，等. 黄芪及其制剂中黄芪甲苷定量分析方法研究进展[J].中国医药指南，2009,7（10）：209-211.

[7] 沈红, 钱大玮. SPE-HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量[J]. 现代中药研究与实践, 2006, 20(1): 45-46.

[8] YAN Lin-xin, GUO De-an. Quantitation of astragaloside IV in rat plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J]. J Chrom atogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2005, 824(1/2):244-248.

[9] 张尚智，韩黎明，贺莉萍，等．中国黄芪专利分析与研究［J］．中国中医药信息杂志，2012，19( 11) : 19-22．

[10] 杨庆珍，刘德旺，黄林芳，蔡敏. 蒙古黄芪不同药用部位中黄芪甲苷的含量测定[J]. 中国生化药物杂志，2015，35(3)：156-158.

[11] 张金红, 周晶, 吴志丽, 等. H PLC-ELSD 法测定黄芪及金芪降糖片中黄芪甲苷的含量[J]. 天津医科大学学报, 2010,16(1):26-29.

[12] 张金红，周晶，宋慧琴，等．碱水解法提高黄芪药材中黄芪甲苷的工艺研究[J]. 时珍国医国药，2010，21( 11) : 2935-2937．

[13] 葛德洲, 邓祖磊. 高效液相色谱-蒸发光散射法测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量[J].中国药业，2015，24（5）：31-32.