双黄连颗粒中黄芩苷的含量测定_开题报告

双黄连颗粒是儿童常用的一种常用的抗病毒中成药物，有疏风解表，清热解毒的功效。主治外感风热所致感冒，症见发热、咳嗽、咽痛;临床常用于小儿呼吸道病毒性感染的治疗，亦可以用于消化系统疾病， 如急慢性肠炎、 幽门螺旋杆菌引起的慢性胃炎、急性胆囊炎等。双黄连颗粒治疗疗效确切、安全、有效， 在临床上应用十分广泛。做为双黄连颗粒主要成分之一的黄芩苷是从由唇形科植物黄芩的干燥根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功效（中国药典.1995.），黄芩苷在有机溶剂中的稳定性较好。黄芩苷是黄芩的主要生物活性成分，其含量测定是控制黄芩质量的关键。它是由金银花、黄芩、连翘三味中药提取精制而成，临床应用广泛[1]。黄芩苷是其主要成分之一[2]，黄芩苷经药理学证实具有清热、抗菌[3]、抗炎[4]、降压、清除氧自由基及抗氧化[5]、利尿[6]、解痉[7]、镇静[8]、抗肿瘤[9]、抗HIV-1[10]利胆、抗变态反应、解毒、扩张血管等作用，临床上用于消火退热、通窍、镇静、降压安神，是黄芩的主要有功效之一。中国药典2005年版采用HPLC法测定黄芩苷含量做为控制双黄连制剂质量的指标。随着黄芩苷在体内代谢研究的不断深入，其作用机制被逐步了解，一般口服后的黄芩苷难以直接被吸收[11]，其产生的苷元黄芩素后进入其体内[12].黄芩素在吸收过程中及入血收形成各种代谢产物，其中主要代谢产物为黄芩苷[13]，因而黄芩素在代表黄芩药效上具有极其重要的地位。

为更好地控制双黄连颗粒的药品质量，以黄芩苷含量为指标，参考其它有关文献[14-18]，建立了以高效液相色谱（HPLC）法测定双黄连颗粒中黄芩苷含量的方法。高效液相色谱法是一种十分成熟的检测手段，对于黄荟苷来说，人们通常用柱或柱作为固定相，普遍釆用甲醇-水-磷酸作为流动相，用紫外检测器检测血清或药物当中的黄芩苷含量。汪旭[19]等建立了高效液相色谱法测定蒡芩慢咽滴丸中黄芩苷含量的方法。方法：采用ODS色谱柱，以甲醇-0.2％磷酸溶液（45:55）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm。结果:黄芩苷的线性范围为0.23-0.14g（r=0.9995），平均回收率（n=6）为100.05％(RSD=0.84％)。结论：该方法简单、可靠、迅速、重现性好，适用于该制剂中黄萃苷的质量。刘刚[20]等讨论了法同时测定双黄连口服液中绿原酸、连翘苷和黄萃苷的含量，方法：采用Aailent C18分析色谱柱(4.6mm×250mm,5μm）；流动相A：5％甲醇（含0.5％磷酸），流动相B：甲醇；流速：1.0mL、min；洗脱程：0～35min，A为95％～35％，B为5％～65％；检测波长程序：0～16min为324nm，16～35，min为278nm。结果：绿原酸、连翘苷和黄芩苷保留时间分别为11.3、26.6、28.0min，与各自相邻峰的分离度>1.5。以峰面积对进样浓度（μg/mL)线性回归，绿原酸、连翘苷、黄芩苷的回归方程分别为：Y=0.03549X+0.05800，r=0.9999,Y=0.1770X-0.02544，r=0.9999，Y=0.03069X-0.7981，r=0.9999,线性范围分别为14.08～56.32μg/mL，14.34～570341μg/mL，61.32～245.3μg/mL。绿原酸、连翘苷和黄萃苷回收率分别为99.7％、98.3％和97.8％，RSD分别为0.33％、1.9％和0.55％。结论：本方法测定结果与年版《中国药典》（一部）测定结果一致，且操作简便、结果准确，可用于双黄连口服液中绿原酸、连翘苷和黄芩苷含量的同时测定。刘伟娜[21]等建立了反相高效液相色谱法测定鼻炎滴剖中绿原酸和黄萃苷的含量，方法：采用RP-HPLC，色谱柱为Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μ）柱，以甲醇-水-磷酸（52：48:0.1）为流动相，检测波长：320nm，流速：1.0mL/min。结果：绿原酸在4.30-34.40g/mL范围内线性关系良好，线性回归方程为：A=127.3C-4.396，r=0.9999，平均回收率102.1％，RSD=0.94％；黄荟苷在15.52-108.64μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为：A=38.15C+55.1，r=0.9997，平均回收率100.8％，RSD=1.4％。结论：该法灵敏、简便、准确，可用于鼻炎滴剂的质量控制。吴钢伟[22]等建立双黄连纳米粒中测定有效成分黄茶苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法测定，流动相：甲醇-水-磷酸（47:53:0.2），检测波长：280nm，柱温：25℃。结果：双黄连纳米粒中黄茶苷的含量测定在0.220～8.800μg/mL的范围内线性关系良好，其回归方程为：Y=3.64×100X-4.11×100，R=0.9999，回收率在97.96以上。日间、日内RSD均小于5.24％（n=5）。结论：方法简便，分离效果好，结果准确可靠，可用于双黄连纳米粒中黄茶苷的质量控制。

二、^范文提纲

[23]

1范围

  本方法采用高效液相色谱法测定双黄连颗粒中黄芩苷的含量。本方法适用于中 成药双黄连颗粒。

2原理

  供试品精密称定，加 50%甲醇超声处理使溶解，并稀释至一定体积，进入高效液相色谱仪

  进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长 274nm 处检测黄芩苷的吸收值，计算出其含量。

3 试剂（除特殊规定者外均为分析纯）

 3.1甲醇及 50%甲醇

 3.2冰醋酸

4 仪器设备

 4.1仪器

  4.1.1 高效液相色谱仪

  4.1.2 色谱柱

    十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按黄芩苷峰计应不低于 1500。

  4.1.3紫外吸收检测器

 4.2色谱条件

  4.2.1流动相：甲醇 + 水 +冰醋酸 = 50 + 50 +1

  4.2.2检测波长：274nm

  4.2.3柱温：室温

 4.3超声波发生器

5试样制备

 5.1称取供试品取本品，研细，并精密称取约 0.5g。

 5.2对照品溶液的制备

  精密称取黄芩苷对照品 10mg, 置 100mL 量瓶中，加 50%甲醇适量，至水浴中

  振摇，使溶解，放置至室温，并稀释至刻度，摇匀（每 1mL 中含黄芩苷 0.1mg）。

 5.3 供试品溶液的制备

  供试品置 50mL 量瓶中，加 50%甲醇适量, 超声处理 20 分钟使溶解，放置至

  室温，加 50%

  甲醇并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5mL，置 10mL 量瓶中，加 

  50%甲醇并稀释至刻度，摇匀，为供试品溶液。

6 操作步骤

  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5μL，注入高效液相色谱仪，紫外吸

  收检测器，于波长 274nm 处测定黄芩苷（C21H18O11）的吸收值，计算出其含

  量。

7结果计算

  定量测定时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法。外标法测定供 

  试品中成分按下式计算含量C =（50/5）×10×（CRAX /AR）×（5/ W）式中：

   C — 为每袋供试品中（每袋装 5g）所含待测组分的量（mg） AX – 为供试

   品峰面积或峰高 AR — 为对照品峰面积或峰高 CR — 为对照品溶液的浓度

   (mg/mL) W —  为供试品称样重量（g）

注：本品每袋（每袋装 5g）含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于 160mg。

8精密度

  取对照品溶液，连续进样 5 次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于  

  2.0%。

三、参考文献

著作：

[1]任玲玲，张春枝，陈吉平，黄芩的抗菌活性及HPLC分析[ J].精细化工,2005,22(8):589-591。

[2]　胡世林,冯学峰.黄芩研究的某些新进展[ J].中国药学杂志,

2001,36(11):728-731。

[ 3] 程国强,冯年平,唐琦文等黄等营对眼科常见病原菌的体外抗菌作用中国医院

药学杂志，2001，21(6):347-348。

[4]张罗修丹参素、黄芥昔对大鼠腹腔巨噬细胞产生及的影响中药药

理与临床,1990,6(4):31-32.

[ 5] Ng T B.Liu Z T,etal..Antioxidative acticity of natural Products from Plants[J].Life Sci.,2000,66(8):709-723.

[ 6] 贺海平,秦管,陈明黄芬类黄酮对人免疫细胞化学发光及淋巴细胞增殖的影响

中国免疫学杂志,2000,66(8):709-723.

[ 7]蔡仙德,谭剑萍,穆维同等黄答昔对小鼠细胞免疫功能的影响南京铁道医学院

学报,1994,13(2):65-68.

[ 8] 罗德生,郑红花,刘琴等黄答煎剂对大鼠急性肝损伤保护作用的实验研究

成宁医学院学报,2001,15(2):92-94.

[ 9] Motoo Y, Sawabu N.Antitumor effects of saikosaponions,baicalin and baicalein on human hepatoma cell lines[J].Cancer Lett.,1994,86(1):91-96.

[ 10] Kitamura K,Honda M,Yoshizaki H,etal..Baicalin, aninhibhor of HIV-1 Production Incitro[J].Anticiral Res.,1998,37(2):131-133.

[11]王弘,陈济民,张清民.黄芩苷在大鼠胃、离体小肠的吸收动力

学研究[J].沈阳药科大学学报,2000,17(1):5-7。

[12]　Zhang Li,Lin Ge,Chang,Qi Role of intestinal first-pass metab-

olism of baicalein in its absorption process[ J].Pharmaceutical

Research,2005,22(7):1050-1058。

[13]　车庆明,黄新立,李艳梅.黄芩苷的药物代谢产物研究[J].中国中药杂志,2001,26(11):768-769。

[14] 韩秋伟.紫外-可见分光光度法测定双黄连颗粒中黄芩苷的含量[J].牡丹江医学院学报，2012，33（2）：21。

[15]汤须崇，肖美添，叶静.HPLC 法同时测定双黄连制剂中绿原酸、黄芩苷和连翘苷的含量[J].江西中医学院学报，2010，22（3）：64。

[16]乔静，李洪亮.HPLC 法同时测定大卫颗粒中绿原酸、连翘苷、黄芩苷的含[J].中国药师，2011，14（7）：985。

[17]刘刚，谭生建，张华，等.HPLC 法同时测定双黄连口服液中绿原酸连翘苷和黄芩苷的含量[J].解放军药学学报，2009，25（5）：461。

[18]宋明侠. HPLC 法同时测定复方金银花颗粒中绿原酸、连翘苷和黄芩苷的[J].按摩与康复医学，2011（5 下）：31。

[19]汪旭，金向群，岳峻威，等。蒡芩慢咽滴丸中黄芩苷的含量测定[J].时珍国医国药2009，20(6)：1447-1448

[20]刘刚，谭生建，张华，等。HPLC法同时测定双黄连口服液中绿原酸、连翘苷和黄芩苷的含量[J].2009，25(5):461-463

[21]刘伟娜，高洁，张雪，等。反相高效液相色谱法测定鼻炎滴剂中绿原酸和黄芩苷的含量[J].时珍国医国药，2010，21(3):640-641

[22]吴钢伟，双黄连纳米粒中黄芩苷的含量测定[J].海峡药学，2010，22(10):71-72

[23]中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2000 版，一部，p.420。