天花粉降糖活性成分的研究开题报告

2． 2 天花粉抗糖尿病活性组分的筛选

2． 2． 1 天花粉中各组分的分离按2． 1． 1 项方法进行醇超声提取，所得浸膏用水溶解后上D101 大孔吸附树脂柱，并依次用水、20%乙醇、40%乙醇、60% 乙醇、80% 乙醇、95% 乙醇洗脱，分别收集各组分( 水洗脱组分、20% 组分、40% 组分、60%组分、80%组分、95% 组分) ，减压浓缩至干。用时各组分别用蒸馏水分别稀释为高( 200 mg /L) 、中( 100 mg /L) 、低( 50 mg /L) 3 个质量浓度。

2． 2． 2 天花粉中各组分对HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响将生长良好铺满细胞培养皿达80% ～ 90% 的HepG2 细胞用胰酶消化后，用含10%胎牛血清的MEM 培养基稀释至适当浓度后，按每孔225 μL 点入48 孔板中，待细胞贴壁并长至80%，换掉培养基，PBS 缓冲液清洗1 次后，分别设置模型组( 一级水) 、阳性对照组( 二甲双胍40 mg /L) 和各处理组( 水洗脱组分、20% 组分、40% 组分、60% 组分、80% 组分、95%组分的高中低3 个浓度) ，将上述溶液25μL 分别加入48 孔板对应各孔，并设平行对照，培养24 h 后用葡萄糖酶法测定试剂盒在全自动生化分析仪上检测葡萄糖残存量，用模型组中的葡萄糖残存量减去阳性对照组或各处理组的葡萄糖残存量便得到各组的葡萄糖消耗量。结果见表2。

2． 3 天花粉中治疗糖尿病活性成分的筛选

2． 3． 1 将剩余80 洗脱组分经多次硅胶柱色谱， 石油醚 －三氯甲烷 －甲醇依次洗脱， 根据薄层色谱结果进行重结晶处理， 得到化合物 化合物 化合物

2． 3． 2 结构鉴定化合物 : 白色粉末结晶， 根据1HNMR 及13CNMR 谱数据可推测为一四环三萜类化合物， 具体结构还有待下一步分析确定化合物 : 白色有光泽鳞片状结晶， mp 61 ～ 63 ℃( 三氯甲烷)1HNMR 及13CNMR 谱数据与文献［ 9］报道的该化合物的光谱数据一致， 因此鉴定化合物 为棕榈酸化合物 : 白色片状结晶， mp 70 ～ 72 ℃( 石油醚-三氯甲烷1HNMR 及13CNMR 谱数据与文献［ 10］报道的该化合物的光谱数据一致， 因此鉴定化合物 为正三十四烷

2． 3． 3  3个化合物对 HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响 将化合物 化合物 化合物 用水充分溶解分别稀释为高( 50mg /L) 低( 5 mg /L) 两个质量浓度， 设置模型组( 一级水) 阳性对照组( 二甲双胍 40 mg /L) 和各处理组( 化合物 化合物 化合物 的高低两个质量浓度) ， 按照2． 2． 2 项方法计算葡萄糖消耗量.   结果见表3

3 讨论

3． 1 实验结果表明: 对于糖尿病人典型的 三多一少 临床症状， 小鼠注入四氧嘧啶后一般情况观察: 第 1 天均比较安静; 第2 天表现为饮食量 饮水量及尿量增加; 用药2 d 内， 用药组( 原粉组 醇超声 醇回流组 水超声组) 精神逐渐好转，皮毛光泽较好， 饮食量 饮水量逐减， 体质量逐增; 模型组情况较差， 皮毛粗乱且无光泽， 体力衰减， 饮食量 饮水量及体质量变化不大; 正常组还是正常生长 连续灌胃14 d 后测定空腹血糖值， 原粉组 醇超声组给药后血糖值与模型组比较( P ＜ 0． 05) 及给药前比较( P ＜ 0． 01) 均呈显著性差异 综上所述醇超声提取方法较好， 具有良好的降血糖功效及改善糖尿病 三多一少 症状 醇超声提取物进一步经大孔吸附树脂柱粗分后得到的6 个组分， 其中80 洗脱组分对细胞葡萄糖消耗量与模型组及其他另外5 个洗脱组分比较， 具有显著差异( P ＜ 0． 001) 再对80 洗脱组分进一步经硅胶柱色谱分离得到的3 个化合物中， 化合物 对细胞葡萄糖消耗量与模型组比较具有显著差异( P ＜ 0． 05)

3． 2 近年临床治疗糖尿病人的资料表明: 天花粉复方制剂具有良好的降血糖作用， 现已报道的降血糖活性化合物是一类植物凝集素类化合物， 称之为天花粉凝集素， 具有抗脂肪分解及促进脂肪合成等胰岛素样作用［11］ 王莉等［12］的报道中表明从天花粉中分离得到 5 种降血糖有效成分， Trichosan

A B C D E 均具有降低正常小鼠的血糖作用， 且 TrichosanA 对四氧嘧啶高血糖小鼠也具有明显的降血糖作用， 并呈剂量依赖关系

本研究利用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型 细胞模型结合提取分离手段，通过考察天花粉各提取方法对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的降血糖作用以及从醇超声提取分离得到的80% 洗脱组分对细胞葡萄糖消耗量的影响， 鉴定了天花粉降血糖的活性成分为80% 乙醇洗脱组分， 从中得到的化合物可能为天花粉降血糖治疗糖尿病的一个活性化合物， 基本骨架为四环三萜类化合物， 具体结构有待下一步深入研究探讨。

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