转移因子胶囊多肽含量分析-开题报告

转移因子(Transfer factor，简称TF，下文均用TF指代)，主要活性成分为小分子多肽类和核糖核苷酸，其中小分子多肽分子量为2000-20000道尔顿，TF 的含量测定方法常采用多肽或蛋白质的含量，测定方法，如双缩脲法，但这类方法具有灵敏度较低、特异性不强、操作烦琐、浊度干扰等不足。福林酚比色法的测定原理为蛋白质或多肽与碱性铜溶液中的Cu 反应形成复合物，此复合物加入福林酚试剂后生成蓝色化合物，该蓝色化合物在波长约650 nm处的吸光度与蛋白质或多肽含量成正比，由此可测定多肽含量。因该法与双缩脲法等比较，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、对浊度干扰不敏感等优点，故可用于微量或高度稀释蛋白质、混合组织蛋白质的含量测定。但在实际操作中虽福林酚比色法较双缩脲法有较高的检测精度，但由于TF小分子多肽天然性质，对热，光等的不稳定，也容易受到反应时间，反应温度，环境等影响，故本^范文从不同角度出发，经过改变不同的实验条件变量，模拟实际检测操作中可能造成的操作偏差，来探索福林酚比色法检测TF含量时的注意事项。

二、^范文提纲

引言：浅谈转移因子多肽含量检测中的影响因素

一、福林酚法测TF含量操作过程

（一）1.试剂

1.1碱性铜试液：取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g,加水50ml使其溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使其溶解，将两液混合作为乙液。

临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。

1.2 福林酚试液：取福林试液(2.0mol/L)1→16。

2.仪器：紫外-可见分光光度计、旋涡混合器。

3.操作法

3.1对照品溶液的制备：取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液，放冰箱内备用。

3.2供试品溶液的制备：照各品种项下规定的方法制备。一般将样品稀释成每毫升中含0.15mg的溶液，若有沉淀，可先加热溶解，不溶的需过滤。

3.3标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液（取2.0mol/L福林试液1→16）4.0ml，在涡旋混合器上立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，取出后如与室温相差太大可先于室温内放置几分钟，以免比色皿表面产生雾气影响检测结果。照紫外-可见分光光度操作程序，在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与相应吸收度计算回归方程。对照与样品同步进行检测。

4.测定法

精密量取供试品溶液1.0ml于试管内，每个溶液均需做平行管，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液（取2.0mol/L福林试液1→16）4.0ml，在旋涡混合器上立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，取出后如与室温相差太大可先于室温内放置几分钟，以免比色皿表面产生雾气影响检测结果。照紫外-可见分光光度操作程序，在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。

（二）影响因素研究项目

从上述操作中，提取关键操作参数，对关键操作进行判断后，决定为以下5个方面，

1. 将福林酚试液加入量。

2. 反应温度。

3. 反应时间。

4、冷水浴时间。

5、波长。

考察转移因子胶囊吸光度的变化情况，通过吸光度的变化，反应上述5个影响因素对检测结果的影响。

（三）影响因素的参数制定

1、确定了相关影响因素，制定具体数据，并对同一TF胶囊样品（3个批次）进行以下参数检测，根据检测数据，评估各条件下对检测结果的影响

条件

参数

福林酚试液加入量

3.0ml

4.0ml（正常参数）

5.0ml

反应温度

45℃

55℃（正常参数）

65℃

反应时间

3min

5min（正常参数）

7min

冷水浴时间

8min

10min（正常参数）

12min

检测波长

640nm

650nm（正常参数）

660nm

C. 参考文献

[1] 国家药品监督管理局.国家药品标准[S] .2000, WS1-SG-039. 

[2] 付旭彬，张少华，李守军．脾脏转移因子的研究进展［J］．畜禽业，2003(3)：10-11

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[4] 蒋微琴，许晓燕，黄岩山，等．甘露醇对转移因子口服冻干粉制剂中多肽含量测定的影响[J]．科技通报，2008，24(6)：827-831

[5] 国家药典委员会．中华人民共和国药典：四部．北京：中国医药科技出版社，2020

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