盐酸二甲双胍缓释片中二甲双胍含量的测定_开题报告

    糖尿病的发生是由于胰岛素绝对或相对缺乏，致使糖、蛋白质、脂肪代谢失常所引起的一种常见性内分泌紊乱性疾病，该病一旦发病，常常伴随患者一生[1]。随着我国不断发展，人们的生活水平不断提高，糖尿病发病率也处于上升趋势，发达国家的糖尿病发病率高达5% ~ 10 %，我国作为发展中国家发病率略低，但已达3%以上[2]。该病不容忽视，已成为继心脑血管疾病和肿瘤之后威胁人类的“第三号杀手”[3]。

 20世纪50年代后期，双胍类口服降糖药盐酸二甲双胍片开始应用于临床。我国已将其列入《社会医疗保险基本目录》，定位为国家基本药物甲类品种。二甲双胍在胰外组织发挥其主要作用，降糖机制为抑制餐后小肠内糖的吸收，抑制肝糖原产生和分解，促进肌肉对糖的摄取，增加葡萄糖转运载体的数量，减少脂肪酸的氧化[4]。在用于单纯饮食控制不佳的II型糖尿病患者可单独使用，特别是肥胖并发高胰岛素血病患者；二甲双胍不仅有降低血糖的作用，还可以对症治疗高胰岛素血症和减轻体重；与磺脲类降糖药物合并使用时，协同治疗效果更好；也可以用于胰岛素依赖性糖尿病患者，与胰岛素联合治疗，使胰岛素的用量减少。目前，盐酸二甲双胍在临床上广泛使用，其安全性高，副作用小，80%以上的患者使用后治疗效果良好，在口服降糖药中有着至关重要的作用[5]。本文对盐酸二甲双胍的药理作用以及含量测定方法研究进展进行了综述。

1 二甲双胍介绍

双胍类口服降糖药盐酸二甲双胍片最早由LIPHA.S.A开发，20世纪50年代后期，在欧洲以及加拿大上市。美国百时美施贵宝公司对该药进行了相关研究，研究发现该药个体差异较大，因而生产了三种不同规格的片剂，分别是500mg、800mg以及1000mg，并在1995年于美国上市，目前在美国口服降糖药市场中所占比例为28%，已成为世界范围内前50位畅销药物。在我国，盐酸二甲双胍片剂收载于2010年版《中国药典》二部，生产厂家各异，价格低廉，疗效确切，在临床上应用广泛，在口服降糖药中所占比例较大[6]。

盐酸二甲双胍为II型糖尿病降糖药物。国内临床试验研究证明[7]，二甲双胍每日口服0.5g或0.85g即能有效控制血糖，相比硫脲类降糖药所欠缺的优点是：首先二甲双胍不增加体重，其次其耐受性良好。盐酸二甲双胍的口服吸收并不完全，且吸收速度慢于排泄速度。口服0.5g和1.5g后，绝对生物利用度范围为40% ~ 60%，且随着剂量的增加绝对生物利用度范围反而减少。除此之外，对生物利用度有影响的还有食物，表现为tmax的延长以及AUC、Cmax的减少。盐酸二甲双胍不能在人体内代谢，仅通过肾脏排泄，其药物半衰期（T1/2）为4.0-8.7h。

2 二甲双胍的药理作用

2.1 对糖代谢作用

    研究表明[8]，二甲双胍会使肝细胞胰岛素受体的酪胺酸激酶活力有所增加，同时，也会使胰岛素抵抗病人脂肪细胞的胰岛素受体与胰岛素的结合力增加。二甲双胍还可以减少脂肪细胞释出游离脂肪酸，从而抑制肝糖原产生，间接使外周的胰岛素敏感性提高，调节内皮功能。研究表明，经二甲双胍培养液培养后，大鼠肝细胞的糖合成和糖异生均受到相关抑制。有证据表明，二甲双胍之所以能够抑制肝糖原的输出是因为阻断糖异生，同时促进了外周组织对糖的利用，肝细胞线粒体摄取了二甲双胍，接着呼吸链的第一复合物被抑制，有利于减少糖异生。

2.2 改善胰岛素抵抗

    二甲双胍能够改善胰岛素的抵抗是因为其作用在肝脏以及骨骼肌。采用胰岛素钳夹技术来考察盐酸二甲双胍对II型糖尿病病人肝脏葡萄糖所产生的影响。结果发现，盐酸二甲双胍能够显著改善胰岛素的敏感性，可使骨骼肌胰岛素敏感性提高5 % ~ 30 %。糖尿病病人从毛细血管转运到组织中的胰岛素减少，有效改善胰岛素抵抗。文献表明[9]，二甲双胍治疗胰岛素抵抗的分子机制主要是对胰岛素的信号转导作用。二甲双胍能够提高胰岛素敏感性的原因之一是促进骨骼肌中的葡萄糖转运蛋白-4 基因表达，进而促使胰岛素信号传递。二甲双胍能够使患者肝脏的胰岛素受体活性快速增强，并最先通过胰岛素受体底物-2 以增强信号，还可以通过增加置换葡萄糖转运蛋白-1来增加糖摄取。研究结果还表明，二甲双胍可使骨骼肌中5 - AMP活化的蛋白激酶激活，届时非典型蛋白激酶的活性增加，糖摄取和糖酵解增强，酯类合成减少，脂肪酸的氧化作用增加。

2.3 对脂肪代谢的作用

    对于合并或非合并II型糖尿病的肥胖患者，二甲双胍均有明显降低体重的作用，通过饮食控制联合二甲双胍治疗可以作为治疗肥胖的一种方法。研究发现[10]，高胰岛素血症多呈现于肥胖患者，胰岛素水平升高程度与肥胖呈正比例关系。肥胖病人脂肪分解旺盛，从而增高血液中的游离脂肪酸浓度。实验表明，β细胞功能的损害可能与游离脂肪酸有直接关系，而二甲双胍的作用就是逆转这种关系。在人体胰腺β细胞中糖代谢受损和葡萄糖缺失是脂毒性的表现，早期胰岛素分泌时相障碍。这种有害作用能被二甲双胍所阻止，因而有直接保护人体胰腺β细胞的作用。

2.4 对血管的保护作用

    二甲双胍能够使血管收缩性、扩张性、灌注性增加。研究表明，二甲双胍能直接恢复大鼠心肌改善缺血后心动能，同时还能减轻心血管系统负荷，改善糖尿病患者血流动力学，抑制纤溶酶原激活物抑制-1，减少血小板的附着与聚集，在微血管循环方面还有抗糖化与抗血栓作用。

3 二甲双胍的含量测定方法

3.1 高效液相色谱法

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）又称“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“高压液相色谱”、 “近代柱色谱”等，是一种高分辨率、高灵敏度的定量、定性分离分析方法。高效液相色谱作为色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。根据检测器的不同，高效液相色谱的灵敏度不同，一般在微克至毫微克的范围内波动。目前高效液相色谱法在二甲双胍的测定方面多有研究。

研究人员采用高效液相色谱法测定二甲双胍的含量[11]。实验结果表明，在测定二甲双胍含量时，高效液相色谱法可以有效消除辅料对含量测定的影响，所展现的专属性良好，能够将降解产物以及有关物质分离开来，主峰与各杂质峰基线分离良好。由准确度、精密度、线性关系可以看出，在测定二甲双胍的含量方面，HPLC法具有一定的可靠性和可行性。也有研究人员测定二甲双胍的有关物质亦采用了HPLC法，结果也尽如人意。还有研究人员在测定复方盐酸二甲双胍片中的二甲双胍和格列本脲含量选用了HPLC法，所得二甲双胍的最低检测限（LOD）为0.20 g/L。

夏学军等建立了RP-HPLC法测定盐酸二甲双胍缓释片的含量及有关物质，该法参考盐酸二甲双胍的药物动力学测定方法，采用ODS-C18色谱柱, 流动相为甲醇-5mmol/L磷酸二氢胺水溶液（用磷酸调p H至3.5），检测波长为232 nm 。线性范围0.0 05 -1.0mg/ml，r=0.9999，检测限0.1ng。平均回收率为99.7%，RSD为0.5%。何菊英等用RP-HPLC法测定盐酸二甲双胍缓释片中盐酸二甲双胍的含量，该法能在8min内测定盐酸二甲双胍的含量，并且方法的重现性好，精密度高，适合于该制剂的含量测定。方利明等人采用RP-HPLC法测定格列双胍胶囊中盐酸二甲双胍的含量，实验表明，用本法测定盐酸二甲双胍的含量，方法简便、快速、准确，重复性好，成本较低，可作为格列双胍胶囊中盐酸二甲双胍的含量测定方法[12]。

3.2 LC / MS / MS 法

    Y . wang 等人以LC / MS/ MS测定盐酸二甲双胍[13]。该方法以苯福明为内标物质，原生质样品的准备包括醋酸酸化，以乙氰脱除蛋白质，并用二氯甲烷洗涤。样品用HPLC分析，采用C18柱( 5μm,50 mm x 4.6mm), 流动相为乙氰+甲醇+l0ml乙酸胺，pH为7.0 ，流速0.6 5ml/min。以Bisystems Sciex API 400 质谱仪作为检测工具，设置成MRM模式，用气压化学离子源进行离子作用。该实验的线性范围是1-200 ng /mL , 精密度小于8.6%, 准确度范围为91 %- 110% ，检测限为250 ug / m L。

3.3 紫外分光光度法

杜力巍等人采用紫外分光光度法测定盐酸二甲双胍缓释片含量, 用水作溶剂, 测定波长为233nm。在0.503-20.12ug / m L 浓度范围内，线性关系良好，平均回收率为9.44%[14]。盐酸二甲双胍的最低检测限为0.0 5035ug / L。实验结果表明采用紫外分光光度法测定盐酸二甲双胍缓释片的含量, 测定结果与高效液相色谱法(HPCL 法) 测定的结果比较无显著性差异, 方法的稳定性良好, 且操作简便、快速、准确、节省试剂, 该方法还可适用于测定盐酸二甲双胍的含量及片剂的溶出度。吴芳等人也采用了该法测定复方盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍的含量, 可不经分离直接测定片剂中盐酸二甲双胍的含量。

3.4 两点电位滴定法

周文娟等提出的两点电位滴定法只需记录滴定终点前附近的两组滴定数据, 由相应公式计算滴定终点体积, 从而确定盐酸二甲双胍的含量[15]。由试验结果可知, 两点电位滴定法是一种简便、快速、准确的测定盐酸二甲双胍的方法, 特别是对片剂样品，不经过滤，大大简化了实验过程。测定结果与药典法一致， 是测定盐酸二甲双胍的简便方法。使用本法时，两点的选择是关键。若两点远离滴定终点, 则会由于溶液性质与终点时相差较大, 导致较大的测定误差；若第一点选择过于靠近终点, 就有可能使第二测量点落到终点之后。另外, 如果因滴定速度过快而无法在终点前选取点时, 也可在终点后选择两点, 只是△ E 需取负值, 公式同样成立。

3.5 荷移光度法

黄薇提出了荷移光度法测定盐酸二甲双胍含量的方法[16]。研究了7,7,8,8 -四氰基对二次甲基苯醒( TCN)Q 与盐酸二甲双胍的荷移反应，并确定了反应条件。TNC Q与二甲双胍形成络合物的反应在842nm处有较强光吸收，表观摩尔吸光系数是2.46 x103L·mo l-1·cm-1, 在丙酮介质中, 二甲双胍的浓度在5-40mg/L 范围内呈线性关系，该方法重现性好,，灵敏度较高，操作简单，用于测定二甲双胍的含量，精密度好，相对标准偏差为1.4% ( n =6)，回收率为97%以上[17]。

4  结论

   综上所述，盐酸二甲双肌作为治疗2型糖尿病的一线及全程药物，其地位已

经越来越受到重视，而且近年来对二甲双胍的药理作用也有了新的认识：包括对糖代谢的影响；改善胰岛素抵抗、对脂肪代谢的影响和对血管的保护作用等。同时，二甲双胍的适当用量，开发准确度高、选择性好、检测限低、灵敏度高的检测方法具有重要意义，对二甲双胍的临床应用也有重大影响。

二、^范文提纲

1 绪论

2 仪器与试剂

2.1仪器

2.2 试剂

3 含量测定方法

3.1 色谱条件

4实验结果

4.1方法学研究

4.2 样品含量测定

5 分析与讨论

5 结论

参考文献

三、参考文献

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