银杏叶制剂中总黄酮醇苷和萜类内酯含量的测定_开题报告

银杏属裸子植物,银杏科,银杏属植物,主产中国。现代科学验证,银杏叶提取物具有扩张冠脉血管、脑血管,增加冠脉流量及脑血流量,改善心脑功能的作用。银杏叶产品的开发对人类健康意义重大。银杏叶制品已经从茶、片剂发展到软胶囊剂型。主要成分为黄酮类和萜烯内酯类化合物。其中,银杏黄酮类成分具有清除体内自由基、扩张脑膜动脉、改善脑血循环功能、改善心肌缺血等作用;银杏内酯是一种血小板活化因子拮抗剂。银杏叶制剂在精神专科医院广泛用于治疗老年性痴呆、脑缺血和记忆力减退等疾病。现有的银杏叶制剂的质量分析方法较为烦复或不够稳定,现参照文献,研究片剂中银杏总黄酮醇苷和萜类内酯的测定方法,为评价制剂质量提供更好的测定手段[1~4]。

一、文献综述

长期以来，许多学者对总黄酮醇苷和萜类内酯进行了大量的关注，并在总黄酮醇苷和萜类内酯含量的测定方面进行了大量的研究工作。总黄酮醇苷和萜类内酯含量测定的方法多种，较为常用液相色谱法和RP-HPLC法等[5,6]。

陈香爱等[7]在HPLC法测定银杏叶粉针中总黄酮醇苷和萜类内酯一文中采用高效液相色谱法测定银杏叶粉针中总黄酮醇苷和总萜类内酯。其中，总黄酮醇苷的测定方法的预处理过程是先将黄酮醇苷进行水解，水解后的物质采用HPLC-UV方法进行测定，萜类内酯的测定方法的预处理过程是采用有机溶剂醋酸乙酯将其萃取，萃取后采用HPLC-ELSD方法进行测定。研究结果表明，以峰高值和浓度值进行线性回归分析，槲皮素在5.104～51.04μg/mL呈良好线性关系，而山柰素在5.000～50.00μg/mL呈良好线性关系，异鼠李素在1.38～13.8μg/mL呈良好线性关系，经过计算，得出三种物质的平均回收率均大于99%。银杏内酯A、B、C及白果内酯分别在0.415～2.075、0.402～2.010、0.426～2.130、0.803～ 4.015mg /mL呈良好线性关系,平均回收率分别为99.28%、100.1%、101.0%、99.31% (n=5)。本实验采用的方法简便快速,结果准确,重现性好,可用于银杏叶粉针中黄酮和内酯类成分的质量控制。

陈再兴等[8]通过对不同季节银杏叶中总黄酮、总黄酮醇苷及萜类内酯的含量测定,确定最适宜的采收季节。方法：采用分光光度法测定银杏叶中总黄酮的含量;HPLC法(紫外检测器UVD和蒸发光散射检测器ELSD)分别测定总黄酮醇苷及萜类内酯的含量。结果：不同季节的银杏叶中总黄酮、总黄酮醇苷及总内酯含量不同。结论:银杏叶的总黄酮在8月份、总黄酮醇苷在5月份、萜类内酯在6月份含量最高。

崔大明[9]在RP-HPLC法测定银杏叶提取物类脂质体中黄酮和萜类内酯含量的优化方法一文中建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC),测定银杏叶提取物类脂质体(EGBN)中银杏3种黄酮化合物(槲皮素、山奈素、异鼠李素)和4种萜类内酯(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)的含量,及银杏总黄酮醇苷的饱和溶解度。采用透析法提取出EGBN中的银杏黄酮。黄酮应用Agilent HC-C18色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以V(乙腈)∶V(0.4%磷酸)=28∶72为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长360 nm,柱温40℃。萜类内酯应用Agilent HC-C18色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以V(甲醇)∶V(四氢呋喃)∶V(水)=46∶7∶47为流动相,流速0.8 mL/min,NEB温度60℃ ,EVA温度105℃。结果表明:透析法可以将EGBN中有效成分很好的分离,从而易于测定其中药物含量。在此色谱条件下,槲皮素、山奈素、异鼠李素分别在2.01～100.50,1.01～50.3,0.26～12.8mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系;银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯采用外标两点测定;平均加样回收率(n=6)均在(100±2)%范围内;精密度试验的RSD(n=6)均<2.0%。并将该法应用于银杏总黄酮醇苷的饱和溶解度的测定。该法灵敏、准确、重复性好,结合透析法可以准确的测定EGBN中黄酮、萜类内酯的含量,适合于银杏叶提取物类脂质体的质量控制。

Young Hac CHO等[11]采用1H-NMR定量测定银杏叶中的白果内醋、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C。HPLC-MS/MS方法也常用于银杏叶提取物内酷类成分的测定。吴雨龙等[12]建立HPLC-ELSD和HPLC-DAD-ELSD方法分析银杏叶提取物及制剂中萜类内酯同时组学的方法也用于荫类内醋的分析。

近年来，有关总黄酮醇苷和萜类内酯的研究很多，包括该类化合物的分离检测、提取等各方面。在植物领域，其化学活性成分的开发及应用等方向逐渐受到人们的关注，所以总黄酮醇苷和萜类内酯含量的测定显得尤为重要。只有准确的测定此类化合物，才能为黄酮类化合物的研究与应用奠定基础。大量的研究资料表明，高效液相色谱法对于银杏中总黄酮醇苷和萜类内酯的提取较为广泛使用，更是一种较为常用的化合物分离的方法。

二、^范文提纲

1.概况

1.1银杏叶制剂中总黄酮醇苷和萜类内酯概况

1.2总黄酮醇苷和萜类内酯研究进展

2高效液相色谱法发展简介

2.1高效液相色谱法原理

2.2高效液相色谱法特点及应用

2.3高效液相色谱主要因素

3总黄酮醇苷和萜类内酯的HPLC测定概述

3.1试验部分

3.1.1仪器和试药

3.1.2色谱分析条件

3.2溶液的制备

3.3线性关系的考察

3.4制剂的含量测定

4 总结

三、参考文献

[1]中华人民共和国国家食品药品监督管理局.银杏叶片国家药品标准(试行)[S]. 2002ZD-1490.

[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S]. 北京:化学工业出版社,2005. 597 -598.

[3]孙丽丽,周沫. HPLC测定银杏叶片中总黄酮醇苷和萜类内酯的含量[J].华西药学杂志,2007,22(2): 201~203

[4]高锦明,王蓝,张鞍灵,等.银杏叶中有效成分的研究[J].西北林学院学报,1995,10(4):94-99.

[5]丁光俊.银杏叶的化学成分与药理研究[J].海峡医药,1999,11(1):6-8.

[6]佘佳红,袁伯俊,柳正良. 银杏叶活性成分的提取制备及测定方法的研究进展[J].中国新药杂志.2000,9(4): 221-224.

[7]陈香爱,袁志芳,张兰桐. HPLC法测定银杏叶粉针中总黄酮醇苷和萜类内酯[J].中草药，2007,38(9):1333-1334

[8]陈再兴,朱旭,王琳,等. 不同季节银杏叶中总黄酮、总黄酮醇苷及萜类内酯的含量变化[J].中国医院药学杂志，2010,30(12):1067-1068

[9]崔大明,金叶,周毓麟,等. 2RP-HPLC法测定银杏叶提取物类脂质体中黄酮和萜类内酯含量的优化方法[J]. 吉林农业大学学报，2013,35(4):446~449

[10]Yan Y Z, Xie P S. Assay of terpene lactones in Ginkgo biloba leaves by RP-HPLD-ELSD [J]. Chin J Pharm Anal (药物分析杂志), 2001, 21(3): 173-176.

[11]Zhang Y Z, Zhou Y Q, Wang J, et al. Determination of terpenlactones in Yinxingye Soft Capsule by HPLC-ELSD[J]. Chin Tradit Pat Med (中成药), 2005, 27(1): 22-24.

[12]吴雨龙, 李艳静, 王佩香等. HPLC-ELSD结合化学计量学研究银杏叶片中萜类内酯指纹图谱[J]. 世界科学技术-中医药现代化, 2013(9):1952-1958.