阿糖胞苷抗肿瘤作用研究进展开题报告

近年来, 分子肿瘤学、分子药理学的发展使肿瘤本质正在逐步阐明；大规模快速筛选、组合化学、基因工程等先进技术的发明和应用加速了药物开发进程；抗肿瘤药物的研究与开发已进入一个崭新的时代[1-4]。当今抗肿瘤药物的发展战略有以下几点：①以占恶性肿瘤90 %以上的实体瘤为主攻对象；②从天然产物中寻找活性成分；③针对肿瘤发生发展的机制, 寻找新的分子作用(酶、受体、基因)靶点；④大规模快速筛选(High-through put screening)；⑤新技术的导入和应用:组合化学、结构生物学、计算机辅助设计、基因工程、DNA 芯片、药物基因组学(功能基因组学与药理学结合)等。抗肿瘤药物正从传统的细胞毒性药物, 向针对机制的多环节作用的新型抗肿瘤药物发展, 目前国内外关注的抗肿瘤作用的新靶点和相应的新型抗肿瘤剂或手段有：①以细胞信号转导分子为靶点：包括蛋白酪氨酸激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂、MAPK 信号转导通路抑制剂、细胞周期调控剂；②以新生血管为靶点:新生血管生成抑制剂；③减少癌细胞脱落、粘附和基底膜降解:抗转移药；④以端粒酶为靶点:端粒酶抑制剂；⑤针对肿瘤细胞耐药性:耐药逆转剂；⑥促进恶性细胞向成熟分化：分化诱导剂；⑦特异性杀伤癌细胞：(抗体或毒素)导向治疗；⑧增强放疗和化疗的疗效:肿瘤治疗增敏剂；⑨提高或调节机体免疫功能:生物反应调节剂；⑩针对癌基因和抑癌基因：基因治疗--导入野生型抑癌基因、自杀基因、抗耐药基因及反义寡核苷酸、肿瘤基因工程瘤菌。

阿糖胞苷最初是在深海海绵中提取得到的海洋药物，是胞嘧啶与阿拉伯糖形成的糖苷化合物。阿糖胞苷药理作用机制研究尚不完全，目前主要有以下几种[5]：

体内代谢酶：

Ara -C 是嘧啶类抑制剂， 广泛代谢是嘧啶类药物转变为活性复合物的必要条件。Ara -C 在体内须经3 个步骤转化为阿糖胞三磷酸核苷(Ara -CT P)才能发挥作用。Ara -CT P 存在于许多细胞中，可能是掺入到脱氧核糖核酸(DNA)的核苷酸链中， 阻止链的延长、引起链的断裂和影响链的复制， 从而抑制肿瘤细胞的增殖而发挥作用的。也有报道Ara -C TP 可结合到拓扑异构酶复合物上限制其活性，从而抑制DNA 合成， 胞嘧啶核苷脱氨酶(CDD)和5 -核苷酸酶(5N T)基因多态现象以及CDD 、5NT 、DCK 和线粒体RNA 加工酶-5 的表达水平与Ara -C 的细胞毒性作用密切相关[6]。

2、转录因子和信号传导通路

Ara -C 掺入DNA 诱导寡核苷酸内部结构的改变可能减少了具有各自DNA 结合元件转录因子的结合容量， 这可能是Ara -C 发挥细胞毒性作用的机制之一， 而对新信使RNA 转录的抑制作用和新蛋白质的翻译抑制也可能是主要的作用机制之一。Ara -C 对细胞毒性的信号传导通路作用也见报道[7]。

3、细胞周期

    临床上大剂量的Ara -C 抗肿瘤作用良好。通过流式细胞仪分析， 大剂量Ara -C 作用于细胞周期静止期(G 0 期)和DNA 合成前期(G1 期)， 中、小剂量Ara -C 作用于DNA 合成期(S 期)， DNA 断裂分析显示Ara -C 呈剂量依赖性诱导细胞凋亡。童彤[8]等研究阿糖胞苷诱导肿瘤细胞的周期阻滞和凋亡，并探讨其相关的机制。阿糖胞苷诱导KB 细胞和H L-60细胞阻滞在G1 期， 而其胞嘧啶类似物云南霉素将细胞阻滞在G2/ M 期，但两者最终都诱导细胞凋亡。阿糖胞苷和云南霉素诱导细胞凋亡都伴有c-myc 蛋白表达水平下降， 阿糖胞苷作用KB 细胞后， 可观察到p53 蛋白和Fas 蛋白水平逐渐增高。结论：阿糖胞苷及其胞嘧啶类似物云南霉素诱导不同的细胞周期阻滞。阿糖胞苷诱导细胞凋亡可以通过p53/ Fas 蛋白依赖和非依赖两条途径来实现。

4、细胞凋亡

诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抗肿瘤的主要机制，而凋亡受阻是机体对化疗产生耐药的主因之一。基因Bcl -2 是迄今研究最广泛的凋亡调控基因之一，它通过广泛抑制各种刺激剂诱发的细胞凋亡， 延长细胞活力而发挥生物学作用。孙立荣[9]等为了研究阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制， 采用G iem sa染色、光学显微镜下观察HL-60细胞的形态学变化， 琼脂糖凝胶电泳检测DNA凋亡带， 细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因Bc-l 2、Bax的蛋白表达。结果显示: 实验组自培养8 小时起， 细胞开始变形， G iem sa染色可见核膜裂解， 染色质呈紫红色或蓝紫色， 出现典型的凋亡小体； DNA 凝胶电泳见典型的梯形条带； 在细胞凋亡的同时伴有B c-l 2蛋白表达明显下降， 而Bax蛋白表达明显升高， B c-l 2 /Bax比值下降。结论: 阿糖胞苷可明显地诱导H L-60细胞凋亡， 同时伴有Bc-l 2蛋白表达降低、Bax蛋白升高。B c-l 2 /Bax比值下降可能是阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的主要机制之一。Surviv in 是凋亡抑制蛋白(GAP)家族的新成员， 是迄今发现最强的凋亡抑制因子， 其过度表达有助于肿瘤细胞的生存和增殖分化。用流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡及周期变化， 逆转录-聚合酶链反应(RT -PCR)方法检测凋亡抑制分子Sur vivin 基因表达，小剂量Ara -C 诱导细胞凋亡作用随时间延长而逐渐减弱， S +G 2(蛋白质合成后期)/M(有丝分裂期)细胞比例随时间延长而逐渐升高， 提示Survivin mRNA 表达水平逐渐增高， Surviv in 基因可能参与了小剂量A ra -C 诱导白血病细胞凋亡过程[5] 。

5、辅刺激分子CD80 和CD86的表达

小剂量Ara -C 在体外可诱导小鼠DA1 -3b 白血病细胞中辅刺激细胞表面分子CD80 表达；体内实验Ar a -C 可诱导CD80 和CD86 表达， 降低B7 -H 表达， 暗示化学疗法能修整体内辅刺激分子表达。体内接触到A ra -C 的小鼠白血病细胞对特异性细胞毒T 淋巴细胞介导的杀伤作用更敏感。李崴等[10]通过体内外实验探讨阿糖胞苷对抗CD3/抗CD19双功能抗体介导的T淋巴细胞杀伤人急性B淋巴细胞白血病（Bacute　lymphoblastic leukemia,B-ALL）细胞的协同作用发现：阿糖胞苷通过上调Nalm-6细胞和部分B-ALL患者临床标本共刺激分子CD80的表达，可有效激活T细胞，并增强双功能抗体介导T细胞体内杀伤细胞的作用。表明以细胞毒T 淋巴细胞为基础的免疫治疗和化疗可协同治疗白血病，这可能暗示A ra -C 治疗白血病的另一机制。

阿糖胞苷于临床长期大量应用取得良效，但仍有较多患者病情不能缓解或缓解后复发， 除患者个体差异和临床用药方案外， 耐药问题可能也是其中的一部分原因 ，起作用机理还需要进一步研究。

二、^范文提纲

摘要

1  阿糖胞苷的药理作用及主要功能概述

2  阿糖胞苷抗各种肿瘤活性研究

2.1阿糖胞苷治疗缓解期急性非淋巴细胞白血病

2.2阿糖胞苷治疗子宫颈癌细胞

2.3阿糖胞苷治疗急性髓性白血病

3  阿糖胞苷联合其他药物提高治疗肿瘤性疾病的研究

3.1阿糖胞+苷鸦胆子油乳治疗老年急性髓细胞白血病

3.2阿糖胞苷+米托蒽醌治疗老年急性髓细胞白血病

3.3阿糖胞苷+拓扑替康治疗血液恶性肿瘤

4讨论及展望

参考文献

致谢

三、参考文献

[1] 丁健,抗肿瘤药物的研究新进展[J],中国新药杂志,2000,9 (3):149-154.

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[10] 李崴,王东,骆惊涛,等. 阿糖胞苷联合双功能抗体介导T细胞杀伤人急性B淋巴细胞白血病细胞体内外研究[J]. 中华肿瘤防治,2014,21(14):1089-1093.