石榴皮中总黄酮提取工艺研究_开题报告

1、研究背景

石榴(Punica granatum Linn)是石榴科(Punicaceae)石榴属（Punica Linn）植物,植株是落叶小乔木或灌木，高3-5米，稀达10米，枝顶常成尖锐长刺，叶对生，浆果近球形，通常为淡黄褐色或淡黄绿色，有时白色，稀暗紫色，种子多数，钝角形，红色至乳白色，肉质的外种皮供食用。石榴原产于巴尔干半岛至伊朗及其邻近地区，据陆巩记载是汉代张骞引入中国，在中国南北各地除极寒地区外都有栽培。

石榴皮外形为片状、瓢状等，颜色为红棕色、暗棕色或棕黄色等，质硬易碎。石榴皮中化学成份的分离和结构鉴定研究已经有几十年的历史，综合各实验结果得到石榴皮中化学成分主要有鞣质类、黄酮类和氨基酸类化合物。国内石榴皮的研究与应用主要在以下几个方面，在废水处理时可直接用于吸附重金属，在临床上主要用于治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾、感染性炎症、小儿消化不良、烧伤和中耳炎等，其乙醇提取物在提高免疫力、治疗消化系统疾病、抗病毒、抗肿瘤、抑菌、抗氧化、美容美白等方面均有应用。

黄酮类化合物（Falconoid）是黄酮系色原烷或色原酮的衍生物，其基本骨架为C-C-C，在植物界分布很广，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞行科、石榴科、银杏科和菊科中。黄酮类化合物以其天然生物活性引起人们的关注，因其可以防止自由基的氧化作用，使得其在医药保健等方面有很广阔的市场潜力。万明（2007）等总结了黄酮类化合物的应用，黄酮类化合物在药理上主要用于抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、抑菌、抗病毒、抗氧化衰老等方面，而在食品工业中主要用于天然甜味剂、天然抗氧化剂、天然色素和保健食品等方面。

人们购买石榴的主要价值在于果实的食用和榨汁，不管是食用还是榨汁，石榴皮通常都被丢掉，因此浪费掉了很多的资源。使得石榴皮在资源潜力的开发上缺乏实际工作，需要进一步做出实际工作，为石榴的开发利用提供宝贵意见。

2、研究进展

2.1  国外研究进展

在石榴中黄酮的检测方法上，国外常用液相色谱法定量分析检测，多数情况下用二极管阵列检测器或紫外检测器，应用高效液相色谱-质谱联用技术对类黄酮进行结构鉴定。在石榴总黄酮的提取方法上，主要使用不同浓度的乙醇溶液为溶剂，其次选择丙酮水溶液，乙酸乙酯应用较少，在不同的温度和料液比下浸提，同时采用水浴回流或超声辅助等手段。

在美洲、欧洲和非洲传统医药中，石榴广泛用于各种疾病的治疗。在古巴民族医药中，石榴果实用于治疗痢疾、微生物感染等疾病。自从1929年Emanuele Flaccomio分析了石榴皮中的成分开始，有关石榴皮中提取物的研究越来越多，S.Rajadurai,Y.Margaret Therasa和K.N.Sastry等人从石榴皮提取物中分析出异槲皮甙和石榴皮碱，Li YunFeng等用铁离子还原法比较石榴汁、石榴皮及石榴籽提取物的抗氧化性能得出石榴皮中黄酮和多酚含量高于石榴籽和石榴汁，Seeram N、Negi、Kamel Gharaouli以及以色列Technion技术研究所的研究人员先后报道了石榴皮能保护乙醇对胃的伤害、抗乳腺癌、抗氧化和抗诱变生物活性的作用，其提取物能够有效防止CCl4对肝脏的毒害。

虽然石榴皮中黄酮类物质的研究开展得比较早，但是以前的研究方向主要集中在对石榴皮中黄酮类物质的定性分析上，准确定量分析和重要活性成分的结构鉴定、制备分离技术方面的研究比较薄弱。

  2.2  国内研究进展

目前针对石榴皮的研究主要是用水或有机溶剂浸泡石榴皮粉，通过加热使其溶解，应用微波、超声、超临界萃取等手段得到粗提液，再通过有机溶剂萃取、沉淀、离心、大孔树脂分离、膜分离等方式提纯，然后再用浓缩和重结晶获得纯度较高的单体物质，在以该单体物质为基础进行药用有效成分和临床应用研究。石榴皮中有效成分的测定方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法等，而针对单一组分则有质谱、核磁共振等检测手段。

石榴皮的应用主要在临床上用于治疗腹泻、溃肠性结肠炎、鸡眼、新生儿尿布皮炎、无排卵性功能失调子宫出血等，在其他行业上应用较少，大多数限于实验室阶段的小型研究，主要是因为我国石榴皮总产量不大、种植范围广、主要种植产品为水果石榴、相关质量标准有待完善等。

而在黄酮类化合物的应用这一块，目前主要应用在两个方面，一是保健食品，二是医药制品。在食品上的应用形式比较单一，主要就是直接食用和作为食品添加剂使用，产品形式主要有液态饮品、果蔬汁饮料、低度发酵酒和茶。在医药制品上的应用形式相对较多，主要有抗心血管药物、抗肝脏毒素药物、止咳平喘药和天然抗氧化剂四个方面，在抗心血管药物方面主要有以银杏叶提取物制成的制剂、沙棘总黄酮开发的天然药品和山楂叶中提取总黄酮制成的片剂三种；在抗肝脏毒素药物方面主要以紫花水飞蓟种子中总黄酮提取物为抗肝素药的重要有效成分；在止咳平喘药方面主要应用于我国研制的防治气管炎的植物药；在天然抗氧化剂方面，主要用于合成抗氧剂替代品。

黄酮的提取方法很多，常用的有热水浸提法、乙醇回流提取法和超声波辅助提取法三种。陈红梅等（2008）对石榴皮中黄酮类物质提取中用热水浸提法、乙醇回流提取法和超声波辅助提取法三种方法进行了实验，得出热水浸提法提取黄酮得率最低，为5.21%，乙醇回流提取法和超声波辅助提取法提得含量差不多，分别为7.52%和8.07%。

在乙醇回流提取过程中，乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间四个因素对提取效果有不同程度的影响。而且由于在不同的气候条件下，石榴皮中黄酮类物质的含量有所差异，又因研究人的不同，导致其提取工艺也不同。王选东等（2003）用对新疆喀什石榴皮中总黄酮提取工艺的研究表明，在乙醇浓度70%，提取温度80℃，提取时间2h，料液比1:20时提取时间最好。陈红梅等（2008）对安徽怀远石榴皮中黄酮提取工艺的研究表明,在乙醇浓度70%,提取温度80℃,料液比1:20,提取时间3h时,总黄酮得率为7.525%。刘素果等(2010)对安徽合肥石榴皮中黄酮的提取工艺的研究表明，在乙醇体积分数60%、温度60℃、时间2h、料液比1:20时，石榴中的黄酮类物质得率为56.25%。王皞燚等（2012）对安徽合肥石榴皮中黄酮的提取工艺的研究表明，在乙醇体积分数65%、温度65℃、时间3h、料液比1:20时，石榴皮中的黄酮类物质得率为1.98%。

综上得到石榴皮中总黄酮的乙醇回流提取工艺中，刘素果等人的乙醇回流提取工艺效率比较高，因此，接下来的研究中可以乙醇体积分数60%、温度60℃、时间2h、料液比1:20作为参考。

二、^范文提纲

1.前言

1.1  综述

1.2  研究现状

1.2.1  国外研究现状

1.2.2  国内研究现状

1.3  存在问题

1.4  本文解决问题

2.材料与方法

2.1  材料

2.2  所用仪器

2.3  试剂

2.4  试验方法

3.结果与分析

3.1  乙醇体积分数对黄酮得率和纯度的影响

3.2  提取温度对黄酮得率和纯度的影响

3.3  提取时间对黄酮得率和纯度的影响

3.4  料液比对黄酮得率和纯度的影响

4 讨论与结论

三、参考文献

[1] 中国科学院《中国植物志》编辑委员会.中国在线植物志[DB/OL].

://frps.eflora.cn/frps/Punica%20granatum,1983.

[2] 朱静.石榴皮中生物活性成分的提取纯化[D].硕士学位^范文，北京,北京化

工大学,2009,(6):1.

[3] 滕碧蔚.石榴皮的研究与应用进展[J].大众科技，2013,(02).

[4] 曾婷婷,照日格图,李树全等.石榴皮的药理应用及其临床应用研究[J].广

东化工,2012,40(15）.

[5] 万明,宋永钢,杨菠.黄酮类化合物的药理作用及其在食品工业中的应用

[J].食品科技,2007,(3):47-49.

[6] 刘安成,李慧,王亮生等.石榴类黄酮代谢产物的研究进展[J].植物学报,2011,46(2):129-137.

[7] Emanuele Flaccomio.The rind of the pomegranate fruit.Rrog.terap[J].

Sez.farm,1992,(18):183-185.

[8] S.Rajadurai,Y.Margaret Theresa,K.N.S.Sastry.Isolation sfisoquercetrin from pomegranate rind[J].Leather Sci,1963,(10):141.

[9] Kamel Gharzouli,Seddik Khennouf,Smain Amira,Akila Gharzouli.Kffects of Aqueous Extracts form Quercus ilex L.Root Bark,Punica granatum L,Fruit Peel and Artemisia herba-alba Asso Leaves on Ethanol-induced Gastric Damage in Rats.phytother.res,1999,(13):42-45.

[10] 陈红梅.石榴皮黄酮类物质不同提取方法的比较[J].安徽农学通报,2008,

14(24):16-17.

[11] 王选东,刘利林,徐宗运.正交设计研究石榴皮总黄酮提取工艺[J].塔里木

农垦大学学报,2003,15(2):11-15.

[12] 刘素果,任琪,温媛媛,等.石榴果皮总黄酮的提取工艺[J].经济林研究.

2010,9(3):62-68.

[13] 王皞燚,王春景.石榴皮总黄酮的提取工艺研究[J].安徽农学通报,2012,19(01-02):109-110.