病毒性肝炎药物靶向给药系统研究_开题报告

一、文献综述

肝脏是人体内最大的代谢器官，同时也是能量转换、消化、排泄、免疫和解毒等过程的重要器官，参与了人体内多种化学物质的合成与代谢。肝脏疾病是临床常见的多发病，极大地影响着人类的健康和生活质量。我国是肝病的重灾区，其中病毒性肝炎占了很大比例，约有1.2 亿乙肝病毒携带者和1000 万例丙肝感染者，有研究表明近80%的原发性肝癌都是由病毒性肝炎引起的[1]。目前临床肝病的治疗手段主要包括外科手术、微创疗法、肝移植术和药物治疗等[2]。药物作为重要的治疗策略，其方法主要是到达肝脏的病变部位、清除致病病毒、修复受损的肝细胞和肝组织，然而目前大多数的肝病治疗药物由于肝脏分布少、药代动力学性质差、毒副作用大等缺点，其应用受到了很大的限制。由于没有合适的药物疗法，肝脏疾病的发生率在过去十年中一直呈增长趋势，这极大地激发了对于新型肝病治疗策略的探究，探索肝病治疗的有效方法和策略是目前亟需解决的重大难题。

肝靶向给药系统(Hepatic targeted drug delivery systems,HTDDS)是一种可以缓释和控释药物的新型策略，它能够将药物有效地递送到肝脏的病变组织和细胞，最大效果地发挥药物的治疗效果，降低毒副作用，减少给药次数和用药量，提高了药物局部浓度，降低了药物的不良反应，对肝病的治疗具有积极的推动作用，是近年来肝病治疗和药剂学领域研究的热门[3]。肝脏靶向给药系统可分为主动型和被动型。被动型的靶向系统一般是采用生物相容性好、毒性低的聚合材料装载药物，利用其在体循环代谢中的“增强渗透保留”效应(Enhanced permeation and retention effect,EPR)和肝脏网状内皮系统的吞噬摄取作用，将药物运送到肝、脾等靶器官，使药物得到浓集，而非靶向器官如心、肺、肾等含量较少，以此降低毒副作用，从而达到靶向作用。主动的肝脏靶向是指在被动靶向的基础上，对药物载体进行靶向介质的修饰，定向地将药物传递到特定的组织和细胞，其常见的模式是利用配体-受体或者抗原-抗体的特异性结合发挥作用[1]。

随着对肝脏组织结构认识的加深，人类不断发现肝脏细胞表面新的靶点，为肝病的靶向治疗提供了更多的作用位点。然而不同种类肝细胞的药物传递方法和不同肝脏细胞的靶向位点、靶向介质以及相关的疾病类型对肝脏疾病治疗的方法和策略均有所不同。尽管肝脏中的80%的细胞是肝脏实质性细胞，但是如Kupffer 细胞、星状细胞和内皮细胞等其他类型的肝脏非实质性细胞，在对病毒，抗体和其他生物成分的吸收中也显示出重要的作用，如果吸收的物质在这些细胞中被完全地降解，就会破坏药物的治疗效果。同样在某些疾病中，肝实质细胞并不是最相关的靶向细胞，对许多未发现有效药物治疗方法的严重疾病来说，肝脏的非实质细胞才是起控制作用的关键。例如，国外学者Poelstra K, Prakash J, Beljaars L认为在病毒型肝炎和非酒精性肝炎中，肝实质细胞是特定的靶向作用细胞[4]；学者贺玲，李健和认为在急性肝炎中是Kupffer 细胞和网状内皮细胞才是特定的作用靶点[3]；Yan H, Zhong G, Xu G等学者认为在肝纤维化和肝硬化的疾病中，肝脏星形细胞是特定的靶向作用细胞[5]；高艳, 李厚丽, 吕青志等学者认为原发性胆汁性肝硬化的靶向治疗细胞是胆管上皮细胞[6]；Smith JS, Xu Z, Byrnes AP几位学者认为在肝癌中，癌细胞才是靶向介入治疗的关键细胞[7]。根据相关文献，几乎所有的这些靶向作用细胞都可以利用各自特定的靶向系统给药，从而更好地发挥药物的治疗效果。

去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)是一种特异性存在于哺乳动物肝实质细胞上的异源低聚物内吞受体，可以特异性地识别乙酰氨基半乳糖残基的寡糖或寡糖蛋白，结合构成的受体-配体复合物可发生簇集内陷，在细胞内被溶酶体内吞，释放药物。ASGP-R 可以有效地传递活性蛋白、抗病毒因子以及抗癌药物至肝细胞内部。这种结合具有分子特异性、种属特异性和组织特异性，并通过肝细胞靶向性发挥肝脏靶向的作用。但是作为配体的寡糖类相关物质在偶联载体制备ASGP-R 受体靶向递送系统的过程中，工艺比较繁琐，操作复杂，限制了此策略的运用。在基因治疗中，腺病毒是很好的靶向载体，一方面由于腺病毒体内无与伦比的转导效率，另一方面是因为肝脏实质细胞存在腺病毒和整合素的自然受体，因此腺病毒可以在肝脏大量地堆积。尽管基于病毒载体靶向肝脏细胞的基因治疗在临床上早已有应用，但是存在着很多的问题，比如病毒的免疫原性。有文献提到：静脉运送高滴度的腺病毒载体可能会导致严重的肝脏炎症。因此，做出安全和有效的载体是一个很大的挑战。为了增强肝细胞癌的特异性治疗，一些策略中运用了单克隆抗体和生长因子识别肽。HCC特异性的单克隆抗体 AF-20 可以直接作用于肝癌细胞表面高度表达大小为180 kDa 细胞表面糖蛋白，但更多的文献报道集中于针对肿瘤表皮生长因子受体的抗体。与其他肿瘤一样，肝细胞癌也表达有表皮生长因子(EGF)受体，文献报道中可以结合这一受体的人鼠嵌合抗体已经进入了临床实验阶段[8]。近年来，可以识别表皮生长因子的寡肽已经被运用在新的治疗策略中，Liu 等[9]阐述了在小鼠的肝癌模型实验中，利用与EGF 受体相结合的寡肽转运人类细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p-21 WAF-1 和鼠的细胞因子GM-CSF 可以产生很好的抗肿瘤效果[10]，证实了基于EGF-R 靶向修饰的基因药物在全身系统给药后的优势[1]。Wolschek 等[2]同样在小鼠的肝癌模型中发现，运用EGF 的配体修饰β-半乳糖苷酶拥有很好的靶向治疗效果。这些研究尽管还没有运用到临床阶段，但至少证明并支持了肝癌特异性治疗的体内有效性，然而此策略仅局限于肝细胞癌的治疗，对于肝脏实质细胞的其他疾病则失去了靶向效果。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是嗜肝类DNA 病毒[4]。HBV 的基因组共有四个ORF(Open Reading Frame)，编码HBV 的x 蛋白、DNA 聚合酶、核心蛋白和外膜蛋白[3]。外膜蛋白与病毒进入宿主细胞有关，分别有大(L)、中(M)、小(S)三种形式，由S、pre-S2 和pre-S1 三个部分组成[5]。位于C 端的4 个跨膜区称为S 区，S 区N 端延伸的55 个氨基酸序列称为pre-S2 区。Pre-S1 区根据病毒基因型可分为108 个氨基酸(基因型D)、118 个氨基酸(基因型E 和G)和119 个氨基酸(基因型A、B、C、F、H)3 种，是pre-S2 区N 端的延伸序列[6]。近年来研究发现，preS1 的2-77 氨基酸肽段在HBV感染宿主细胞的过程中必不可少，Stephan urhan 等[7]通过固相多肽合成该段氨基酸序列，运用乙酰化、豆蔻酰化修饰等方式对多肽序列的N 端进行加工，获得了preS1 特殊肽段，可成功阻断HBV 对诱导分化的HepRG[11]细胞、人类原代肝细胞(primary humanhepatocytes，PHH)[12]和树鼩原代肝细胞(primary tupaia hepatocytes，PTH)[8]的感染，并通过氨基酸序列特定位点删除、突变等方式设计合成了一系列的类似多肽，利用HBV感染的细胞模型对HBVpreS1 各段序列的功能和作用进行了探索。最终确定了pre-S1各段氨基酸序列在HBV 感染中的作用，发现了第9-21 位氨基酸是HBVpreS1 结合肝实质细胞的高度保守序列，豆蔻酰化修饰的肽段HBVpreS1/2-48myr 是最有效的阻断抑制序列， 而 HBVpreS1/2-21myr 为有效阻断抑制的最短序列， 其序列为myr-GTNLSVPNPLGFFPDHQLDP-NH2。2012 年，李文辉等[9]运用质谱分析加双重亲和纯化的技术， 成功揭示了钠离子- 牛磺胆酸共转运多肽(Sodium taurocholatecotransporting polypeptide,NTCP)是HBV 和HDV 的功能性受体，所用的探针正是HBVpreS1 多肽。这提示了HBVpreS1 是肝细胞表面的NTCP 的特异性靶向分子，利用其受体与配体特异性结合作用，可以设计成为肝脏靶向给药系统的新型靶点。

综上所述，根据文献资料的研究，几乎所有的肝靶向作用细胞都可以利用各自特定的靶向系统给药，从而更好地发挥药物的治疗效果，而目前关于肝靶向给药系统的研究均比较笼统和零散，专门针对病毒性肝炎药物靶向给药系统的文献也很少，因此有必要针对这类肝病的靶向给药系统做一专门的研究。

二、^范文提纲

1前言

2病毒性肝炎概述

2.1病毒性肝炎的概念

2.2病毒性肝炎的类型

3肝脏靶向给药系统概述

3.1肝脏靶向给药系统概念

3.2肝脏靶向给药系统在靶向肝各类细胞中的策略和应用

4病毒性肝炎抗病毒治疗靶向系统

4.1乙型肝炎抗病毒治疗靶向系统

4.2丙型肝炎抗病毒治疗靶向系统

5总结

三、参考文献

[1]Liang X, Bi S, Yang W, et al. Reprint of: Epidemiological serosurvey of Hepatitis B in China--declining HBV prevalence due to Hepatitis B vaccination [J]. Vaccine,

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[3]贺玲, 李健和. 肝靶向给药系统的研究进展 [J]. 研究进展, 2010, 17(9): 15-17.

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[5]Yan H, Zhong G, Xu G, et al. Sodium taurocholate cotransporting polypeptide is a

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