冬凌草甲素的结构修饰及药理活性研究进展_开题报告

图2  5,3′,4′-三羟基-6,7-二甲氧基黄酮.             胡麻素

2、 三帖类及甾体类成分

现已从冬凌草中分得三帖类化合物，如甾体类成分β-谷甾醇、2α-羟基-乌索酸等。木栓(friedelin)、豆甾醇、α-香树脂醇、熊果酸和齐墩果酸[2]。

3、单萜类及挥发油类成分

冬凌草中含有大量挥发油类物质，多为单萜及长链烃类，如α-蒎烯[3]、β-蒎烯、柠檬烯、1,8-桉叶素、对-聚伞花素、壬醛、癸醛、β-榄香烯、棕榈酸、三十三烷、棕榈酸、1，8-桉叶素、柠檬烯、α-蒎烯、β-蒎烯等化合物。

4、黄酮类成分 

冬凌草中含有黄酮类成分，包括：5,4′-二羟基-6,7,8,3′-四甲氧基黄酮、5,3′,4′-三羟基-6,7-二甲氧基黄酮、大黄素8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚、线蓟素，槲皮素，胡麻素，苜蓿素等。

5、有机酸、氨基酸、糖类成分 

冬凌草中的有机酸有1，5-二-（3,4-二羟基苯基）-乙烯醚、3-（3,4-二羟基苯基）-2-异丙氧基-丙酸、邻苯二甲酸双-（2- 乙基己基）酯[4]、咖啡酸、水杨酸、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯、阿魏酸、丹参素甲正丁酯、3 ,4- 二羟基苯乳酸、香草酸、原儿茶醛[5]（10Z,14Z）-9,16-二羰基-10,12,14-三烯-十八碳酸等；此外冬凌草中还含有α-D-呋喃果糖、葡萄糖、甘露糖等单糖及大量多糖氨基酸[6]。冬凌草中氨基酸含有 18 种氨基酸，即谷氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、脯氨酸等，以谷氨酸含量最高，其中人体必需的八种氨基酸，冬凌草含有 7 种。冬凌草多糖 RPPSIIa 是由冬凌草中提取的均-葡聚糖[7]。

6、生物碱类和其他含N类化合物

冬凌草碱（donglingine）、aurantiamide acetate、N-(2-氨甲酰基-苯基)-2-羟基苯甲酰胺-5-O-β-D-阿洛糖苷（N -（2-aminoformyl- phenyl）-2-hydroxy benzamide-5- O-β-D-allopyranoside）、2-氨基-3-苯丙基 2-苯甲酰 氨 基-3-利 胆 醇 酯 （2-amino-3-phenylpropyl-2- benzamido-3-phenylpropanoate）、2′-乙酰氨基-3′-苯基丙基-2-苯甲酰氨基-3-苯基丙酸酯、4-乙酰氨基丁酸、黄嘌呤、7-羟基-4（1H）-喹啉酮。4-乙酰氨基丁酸(4-acety-lami-nobutanoicacid)、N-(2-氨甲酰基-苯基)-2-羟基苯甲酰胺-5-O-β-D-阿洛糖苷[N-(2-Aminoformyl-phen-yl)-2-hydroxy benzamide-5-O-β-D-allopyranoside]和aurantiamideacetate等[8]。

三 冬凌草甲素的药理作用

1、冬凌草甲素的抗肿瘤作用

1.1抑制肿瘤细胞增殖作用

抗肿瘤作用是冬凌草最重要的药理作用，冬凌草中的许多二萜类成分对癌细胞都有抑制作用，其中最主要抗癌活性成分为冬凌草甲素(ORI)。体外实验研究发现冬凌草对 20 多种肿瘤细胞均有较强的抑制作用。杜海爽等人运用 MTT 比色法检测冬凌草甲素对 人乳腺癌 Bcap-37 细胞的增殖抑制作用，相差显微镜观察细胞形态变化，流式细胞仪分析细胞周期分布，RT-PCR检测 P21、cdc2 和 cyclin B1 mRNA 表达来测定冬凌草甲素对人乳腺癌细胞株Bcap-37 细胞的生长抑制作用，发现冬凌草甲素对 Bcap-37 细胞有显著的增殖抑制作用，呈时间剂量依赖趋势( P ﹤0.01)；处理后的 Bcap-37 细胞发生明显的形态改变; 作用 24 h 后，Bcap-37细胞在 G2/ M 期阻滞; 冬凌草甲素作用 Bcap-37细胞后，P21 mRNA 水平的表达增加，而 cdc2、cyc-lin B1 mRNA 的表达降低( P ﹤0.05) [9]。

1.2 Ori诱导肿瘤细胞凋亡和增加对凋亡细胞吞噬作用

细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发育,维护内环境稳定,由基因调控的细胞主动死亡过程。冬凌草甲素能有效诱导下列肿瘤细胞株凋亡：人白血病HPB-ALL；人肝细胞癌BEL-7402；人宫颈癌Hela;鼠纤维肉瘤L929；人组织细胞淋巴U937；人黑色素瘤A375-S2等。冬凌草甲素诱导肿瘤细胞凋亡的具体途径可能与细胞的类型、状态、信号途径中的各个效应器的活性及功能有关。流式细胞仪检测结果显示，经冬凌草甲素处理的HL- 60细胞呈现凋亡细胞所特有的亚 峰，凋亡比率随浓度增加而增高[10]。细胞凋亡在肿瘤的发展过程中起负调控作用，大量研究表明 Ori 具有诱导细胞凋亡的作用。Ji 等［11］研究发现 Ori 能时间和剂量依赖的诱导人结肠癌 SW620 细胞凋亡，其作用机制与激活 Caspase-3 有关。Zhao 等［12］研究了 Ori 对人多发性骨髓瘤 LP-1 的细胞作用，结果发现凋亡相关基因 PDCD5、Bid 表达上调，而 Bcl-2、NF-κB 表达下调[13]。杜海爽和余越美等人发现冬凌草甲素可以诱导乳腺癌细胞 Bcap-37 发生凋亡；彭延延等人还发现冬凌草甲素能显著抑制乳腺癌细胞 MDA-MB-231 的侵袭，这种作用可能与下调 MMP-2 和 MMP-9 的启动子活性和酶活性有关。

1.3 降低肿瘤细胞的钠泵转运活性

抑制肿瘤细胞从周围环境中摄取营养物质，以拮抗肿瘤细胞的快速增生,从而延缓肿瘤细胞的生长速度，使瘤体缩小或消失。其作用机制可能为：①通过与受体结合直接抑制肿瘤细胞的钠泵转运活性。②通过抑制细胞Na-KATP酶活性而降低钠泵转运活性。③通过某些生化环节在抑制肿瘤细胞增生的同时，间接地表现为钠泵转运活性降低。

1.4 增强其他抗肿瘤药物的疗效

冬凌草甲素与化疗药物的联合应用具有相互协调、互相促进的作用,既能增加化疗药物对肿瘤细胞的杀伤能力。又能减少药物对正常细胞的损伤。

2、冬凌草甲素的抗菌抗炎作用

冬凌草甲素对小神经胶质细胞引起的致炎作用和神经功能紊乱有调节作用，用脂多糖对大鼠小神经胶质细胞进行刺激，结果发现冬凌草甲素可以通过减少NO、TNF-α 、IL-1β 、IL-6 释放停止或减轻炎症反应，同时抑制DNA与逆转录酶因子NF-κB结合，另外冬凌草甲素对神经营养因子有正调节作用。试管法体外实验证明，冬凌草醇提物对金黄色葡萄球菌及甲型链球菌有明显抗菌作用，有效浓度均在1:128-1:256之间，去鞣酸不影响其作用，去挥发油后作用有所降低。

3、冬凌草甲素的细胞毒作用

3.1 冬凌草甲素 

    冬凌草甲素对人体食管鳞癌细胞株CaEs-17有明显的抑制作用,2及3μg·mL-1浓度时对细胞生长抑制率分别为40%及75%。对小鼠10毫克/公斤/天腹腔注射      给药时，对S180、艾氏腹水癌及肝癌腹水型平均存活期延长率分别为70%、>85%、>112%；同剂量对S180、艾氏腹水癌、肝癌及网织细胞肉瘤实体型(ARS)亦有抗肿瘤作用，瘤重抑制率分别为40%、52%、37%及34% (P值均小于0.05)；但对白血病(L615)、淋巴肉瘤1号腹水型(L1)和脑瘤(B-22)没有明显活性。冬凌草甲素和顺铂对体外小鼠肉瘤S180细胞的细胞毒和DNA交联有协同作用;用MTT比色法测定冬凌草甲素与顺铂合用的细胞毒性,冬凌草甲素0.5、1.0μg· ml-1与顺铂合用于S180细胞24h的IC50值分别为顺铂单用的1/3.4，1/6.7；用改良的碱性洗脱测定两药引起的DNA链间交联和DNA蛋白质交联，合用较单用引起的交联量明显增加(P <0.05)。

4、冬凌草甲素的抗氧化作用

冬凌草甲素40 μmol/L 抑制铁-半胱氨酸（Fe2+-Cys）引起的肝线粒体 MDA 形成，并呈剂量依赖关系。冬凌草甲素 160 μmol/L 抑制肝线粒体膜流动性下降。冬凌草甲素能明显清除黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统产生的超氧自由基以及 Fenton反应中的羟自由基。170 μmol/L 对超氧自由基和羟自由基的清除率分别为 49.4％和 75.2％。冬凌草甲素对多形核白细胞（PMN）呼吸爆发时产生活性自由基同样显示明显清除作用。

5、冬凌草甲素的β受体阻断作用

冬凌草甲素可阻断β受体，表现出负性肌力和负性频率作用，作用强度为较普萘洛尔弱一个数量级，为一级的β受体阻断剂。此外冬凌草甲素还具有显著的降压作用，其特点是主动脉舒张压下降幅度大于主动脉收缩压，推测冬凌草甲素可能具有抗扩张血管的作用。

二、^范文提纲

（一）冬凌草甲素结构修饰国内外研究概况

1.1  冬凌草甲素的提取分离及制备研究进展

1.2  冬凌草甲素结构修饰途径及其修饰物

（二）冬凌草甲素药理活性研究进展

2.1 冬凌草甲素的抗肿瘤作用

2.1.2 抑制肿瘤细胞增殖作用

2.1.2 增加对凋亡细胞吞噬作用

2.1.3 抑制癌细胞DNA，RNA和蛋白质的合成

2.1.4 抗突变作用

2.1.5 对机体免疫功能的影响

2.1.6降低肿瘤细胞的钠泵转运活性

2.2 冬凌草甲素的抗菌抗炎作用

2.3 冬凌草甲素的细胞毒作用

2.4 冬凌草甲素的抗氧化作用

2.5 冬凌草甲素的β受体阻断作用

三、参考文献

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