冬凌草甲素对多发性骨髓瘤抗肿瘤的机制研究_开题报告

一、文献综述

近年来，中药治疗肿瘤因其毒副作用小而进入了人们的视野，其治疗肿瘤特别是对诱导细胞凋亡的研究一直以来受到人们的广泛关注。多发性骨髓瘤是一种常见得血液系统恶性肿瘤，来源于终末分化的B淋巴细胞，以骨髓中大量浆细胞恶性克隆性增生、血清或尿中出现单克隆免疫球蛋白，而正常免疫球蛋白受到抑制及广泛的溶骨病变为主要特征。由于该病的发病的发病机制尚不明确，亦缺乏有效的治疗方法，目前被视为不可治愈的疾病。因此，寻找有效的治疗靶点以及靶向药物具有重要的理论和实际意义。找出能够诱导肿瘤细胞凋亡的中药提取物已经成为当前肿瘤治疗的热点和方向。而对冬凌草甲素抗肿瘤的研究也成了热点。研究成果主要体现在以下几个方面：

1、段浩清等人通过用CCK-8法检测冬凌草甲素对细胞增殖的影响;瑞氏染色法观察细胞的形态学改变；流式细胞术方法检测细胞凋亡；实时荧光定量PCR方法检测U266细胞FGFR3、BCL2、CCND1、MYC基因表达水平的变化；Westen Blot方法分析BCL2、MYC、CCND1、FGFR3和P53蛋白表达水平的变化。得出结果：冬凌草甲素能够抑制U266细胞增殖，且呈浓度和时间依赖性；10uM冬凌草甲素处理U266细胞24小时后，光学显微镜下可以观察到典型的细胞凋亡形态学改变；U266细胞凋亡比例随冬凌草甲素药物浓度及作用时间的延长而增加；经冬凌草甲素处理后的U266细胞中，FGFR3、BCL2、CCND1、MYC基因表达下调，同事其相应的蛋白质表达下调，P53蛋白表达，上述变化均呈浓度和时间依赖性。[1][2][3]

    2、曲佳等采用MTT法和流式细胞术检测Ori作用后ARH-77细胞的活力和凋亡情况相差显微镜下观察细胞形态改变，RT-PCR法检测Bcl-2家族成因的基因表达变化。结果显示：Ori能明显抑制ARH-77细胞的生长，且呈时间-剂量依赖性。[4][5]

3、曾蓉等利用MTT比色法检测Ori对细胞增殖活性的影响；碘化丙啶（PI）单染流式细胞术检测细胞周期；TUNEL法检测细胞凋亡；Western Blot技术检测P65核蛋白水平。结果显示Ori能明显抑制RPMI 8226细胞增殖，其抑制作用呈时间、剂量依赖性；能同时引起细胞G2/M细胞周期阻滞、细胞凋亡和P65核蛋白水平下降；吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）抑制核因子Kb(NF-kB)活性后进一步促进了Ori所致的细胞G2/M细胞周期阻滞和凋亡。[6][7]

4、温州医科大学通过CCK-8法检测冬凌草甲素对U266细胞生长抑制率的影响；对细胞进行瑞氏染色，光学显微镜下观察冬凌草甲素处理细胞24小时后U266细胞形态学改变；TUNEL细胞凋亡检测法定性检测药物浓度和作用时间对细胞凋亡的影响；流氏细胞术法进一步验证药物浓度和作用时间对细胞凋亡的影响；实时荧光定量PCR检测药物对U266细胞中FGFR-PBK/Akt信号通路相关基因FGFR3、MDM2、BCL2、CCND1、MYC、P53和Bax的表达水平相关蛋白FGFR3、MDM2、Bcl2、CCND1、MYC、P53和Bax、mRNA表达水平的影响；蛋白印迹方法分析药物对U266细胞中FGFR3-PBK/AKT信号通路相关蛋白FGFR3、MDM2、BCL2、CCND1、C-MYC、P53和Bax的表达蛋白FGFR3、MDM2、BCL2、CCND1、C-MYC、P53和Bax的表达水平的变化。得出结果：冬凌草甲素能抑制U266细胞增殖且该作用呈浓度和时间依赖性；冬凌草甲素处理U266细胞24小时后，光学显微镜下可观察到单个细胞的胞体缩小，与其它细胞连接减少、细胞膜小泡状形成、胞质空泡出现、核质浓缩、核膜核仁破碎等典型的细胞凋亡形态学改变；经冬凌草甲素处理后的U266细胞中，FGFR3、MDM2、BCL2、CCND1、MYC基因与其相应的蛋白表达下调；P53、Bax基因和其蛋白表达上调，上述变化均呈浓度和时间依赖性。[8][9][10]

5、军事医科学院通过对冬凌草甲素在体外与体内实验中观察到，Or在体内可以有效抑制肿瘤细胞的生长，体外可抑制移植瘤的生长，其抗肿瘤作用机制可能与阻断肿瘤生长的信号传递，引起肿瘤细胞周期阻滞、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤侵袭转移等有关。[11][12][13]

6、郭坤元等运用不同浓度Ori作用于ARH-77细胞，MTT法检测ARH-77细胞的增殖，相差显微镜和Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学改变，流式细胞术检测ARH-77细胞的早期凋亡及线粒体膜电位的变化，caspase8凋亡试剂盒检测ARH-77细胞caspase8的活化。结果显示，Ori对ARH-77细胞的生长有明显的抑制作用，且呈时间和剂量依赖性。10umoi/L Ori作用于ARH-77细胞24小时后可见细胞变小、胞质中出现空泡，并可见凋亡小体。流式细胞术结果显示，经不同浓度Ori处理后，提示ARH-77细胞凋亡有显著增加。同时，Ori处理可上调ARH-77细胞caspase8的活性。 [14][15]

7、赵晶等采用不同浓度冬凌草甲素处理人多发性骨髓瘤LP-1细胞，通过MTT比色法检测LP-1细胞的增殖活性，Annexin V/PI双染色法检测LP-1细胞的凋亡效应，透射电子显微镜观察药物作用后细胞超微结构的变化，RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA表达变化。结果显示，冬凌草甲素抑制LP-1细胞增殖呈时间和剂量依赖性；Annexin V/PI双色法检测显示，随着作用药物浓度的增加以及药物作用时间的延长，LP-1细胞凋亡率显著增加。通过透射电子显微镜可见药物作用后的细胞呈现核染色质边集，线粒体肿胀等细胞凋亡的表现。冬凌草甲素作用后LP-1细胞中PDCD5、Bid mRNA表达上调，BCL-2、NF-Kb mRNA表达下调。[16][17]

二、^范文提纲

   引言：论述冬凌草甲素对多发性骨髓瘤抗肿瘤的机制研究。

 1、抑制肿瘤细胞增殖

   1.1、阻遏细胞周期

   1.2、下调端粒酶活性

   1.3、抑制细胞钠泵活性

  2、诱导肿瘤细胞凋亡

   2.1、死亡受体和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶

   2.2、线粒体相关信号途径

  3、其他

  4、结语

    

三、参考文献

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