丹参中水溶性酚酸组分的分离提纯分析_开题报告

1.1 丹参及其药理作用

丹参是唇形科植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根和根茎，其是治疗心脑血管疾病的传统中药材，其性微寒，味苦，具有活血祛瘀、养血安神、调经止痛、凉血消痈的功效。丹参具有抑制动脉粥样硬化、减少心肌耗氧量、抗肝纤维化、抗消化性溃疡、抗菌消炎及抗肿瘤等作用，且最新研究表明其具有改善脑缺血再灌注损伤、改善血液流变学及血小板功能、保护心血管系统、保护听力等方面有多环节、多途径、多靶点的作用[1]。

1.2 丹参的有效成分

丹参的有效成分主要可以分脂溶性组分和水溶性组分，脂溶性组分主要是醌、酮类物质，包括：丹参酮I、丹参酮IIA、隐丹参酮、异隐丹参酮等，其中丹参酮IIA含量最高，含量约为药材的0.1-0.9%；水溶性组分主要是酚酸类物质，包括：丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、咖啡酸、丹酚酸A-G等，其中丹酚酸B含量最高，含量约为药材的2-8%[2]。因此，中国药典中规定丹参的质量标准为丹参酮IIA≥0.20%，丹酚酸B≥3.0%。不同来源的丹参药材有效成分差异较大，产地、采收期、病害、根色、根的粗细以及药材部位等因素均对丹参中水溶性酚酸组分绝对含量有很大影响，但对各组分的相对含量影响不大，水溶性酚酸组分指纹图谱也基本相同[3]。

1.3 丹参中水溶性酚酸组分的检测

丹参中总酚酸含量的检测主要采取紫外分光光度法和高效液相色谱（HPLC）法2种，其中紫外分光光度法操作简单、方便快速，但其易受其它因素的干扰，准确性较差；而HPLC法分辨率高、结果准确，是目前广泛使用的方法。中国药典中规定丹参有效成分的检测方法也是HPLC法，以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，其中丹参酮IIA以甲醇-水（75：25)为流动相，检测波长为270 nm；丹酚酸B以甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）为流动相；检测波长为286 nm。

1.4 丹参水溶性酚酸组分的提取

传统的丹参提取工艺为双提法，即先醇提脂溶性组分再水提水溶性组分，但该方法受热时间长，而丹参中两类成分的稳定性均较差，导致丹参主要有效成分特别是后提取的水溶性酚酸组分提取率较低，丹酚酸转移率仅在55%左右[4]。丹参水溶性酚酸的大量制备一般采用水提法，目前使用比较广泛的是水煎回流法、超声辅助提取法等，由于丹参酚酸类物质的不耐热性，水煎法往往造成其有效成分的损失，因此超声提取法比常规具有更好的效果。

郜舒蕊等[5]以均匀设计考察乙醇体积分数、液料比、提取时间对丹参提取效率的影响，结果表明以75%乙醇，液料比200 mL g-1，提取时间10 min下迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮及丹参酮ⅡA提取量与中国药典中规定的加热回流法无显著差异，说明超声提取工艺具有提取时间短、低毒、无污染等优点。刘敏彦等[6]对煎煮、超声、索氏提取3种不同提取方法中丹参水溶性成分含量进行了比较，结果表明超声、索氏提取水溶性酚酸含量均高于煎煮法，其中超声提取丹酚酸B含量最高，而索氏提取丹参素、原儿茶醛含量最高。薛治浦等[7]以响应面法优化丹参叶总酚酸超声波辅助提取工艺，结果表明提取溶剂醇（乙醇）体积分数、提取时间、温度和液料比对水溶性酚酸得率有很大影响，在优选工艺条件下总酚酸提取率高达7.78%。

1.5 丹参中水溶性酚酸组分的纯化

水提醇沉工艺是水溶性酚酸组分的纯化的传统纯化方法，广泛应用在复方丹参提取液、丹参注射液等的生产工艺中。但有研究表明，水提醇沉工艺中高醇浓度造成水溶性总酚酸含量损失严重[8]。近年来，吸附澄清、高速离心、超滤、大孔树脂法等新的丹参中水溶性酚酸组分纯化工艺得到发展，其中大孔吸附树脂法具有操作简单、选择性强、节省溶剂等优点，具有广阔的推广应用前景[9]。

大孔树脂是以苯乙烯和丙烯酸酯为单体，二乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，其主要是通过树脂和目标物质之间的范德华力在树脂表面进行物理吸附，再根据吸附力及分子量的大小以不同的溶剂洗脱而达到分离纯化的目的。贾永艳等[10]筛选了大孔树脂纯化丹参水溶性成分的最佳工艺，结果表明以D101型大孔树脂、上样量100 mL药液/30 mL树脂、除杂剂为纯水、洗脱剂为50%乙醇进行纯化后纯化物中丹酚酸B的质量分数可达68%，有效地对丹参水溶性成分进行了纯化。张秋燕等[11]以大孔吸附树脂法纯化丹参水溶性成分，结果表明丹酚酸B的纯度可达70%以上。

1.6 研究述评

丹参是我国传统的中药材，其中水溶性酚酸组分是其主要的活性成分，但目前通用的其提取和纯化方法均有较大的缺点。近年来，丹参水溶性酚酸的提取和纯化中分别出现了超声提取法和大孔吸附树脂法等新方法，但其应用研究还相对较少，以上述方法开展其提取和纯化研究具有重要的价值。

二、^范文提纲

1 引言

1.1 文献综述

1.1.1 丹参及其药理作用

1.1.2 丹参的有效成分

1.1.3 丹参中水溶性酚酸组分的检测

1.1.4 丹参水溶性酚酸组分的提取

1.1.5 丹参中水溶性酚酸组分的纯化

1.1.6 研究述评

1.2 研究内容与研究意义

2 材料与方法

2.1 仪器与材料

2.1.1 主要仪器

2.1.2 主要材料

2.2 HPLC法

2.3 超声提取法

2.4 大孔吸附树脂纯化法

3 结果与讨论

3.1超声提取丹参中水溶性酚酸组分

3.1.1乙醇体积分数的影响

3.1.2提取时间的影响

3.1.3 温度的影响

3.1.4 液料比的影响

3.1.5 提取工艺验证

3.1.6 小结

3.2大孔吸附树脂纯化丹参中水溶性酚酸组分

3.2.1 大孔吸附树脂的选择

3.2.2 大孔吸附树脂吸附条件筛选

3.2.3 大孔吸附树脂洗脱条件筛选

3.2.4 纯化工艺验证

3.2.5 小结

4 结论和展望

4.1 结论

4.2 展望

三、参考文献

[1] 马丙祥, 董宠凯. 丹参的药理作用研究新进展[J]. 中国药房, 2014, 25(7):663-665.

[2] 刘静, 戴忠, 王钢力,等. 丹参活性成分及相关分离分析方法研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志, 2012, 18(11):288-295.

[3] 盛东峰, 李俐俐. 不同来源丹参药材酚酸类成分的分析研究[J]. 热带亚热带植物学报, 2013, 21(3):259-265.

[4] 翟永松, 刘树林, 高子淳,等. 同时提取丹参中两类有效成分的闪式提取工艺研究[J]. 中国新药杂志, 2014, 23(13):1579-1582,1586.

[5] 郜舒蕊, 赵志刚, 侯俊玲,等. 均匀设计法优化丹参中4种活性成分的超声提取工艺[J]. 中国实验方剂学杂志, 2014, 20(10):8-12.

[6] 刘敏彦, 赵韶华, 盖潇桦,等. 丹参不同提取方法中水溶性成分含量的比较研究[J]. 时珍国医国药, 2007, 18(5):1186-1187.

[7] 薛治浦, 李欣, 朱文学. 响应面法优化丹参叶总酚酸超声波辅助提取工艺[J]. 食品科学, 2011, 32(12):34-38.

[8] 高霞, 王著明, 温守俭. 不同水提醇沉法纯化丹参总酚酸工艺的比较[J]. 吉林医学, 2009, 30(7):614-615.

[9] 孙敬蒙, 任钰, 张炜煜. 丹参抗肝硬化水溶性成分纯化工艺的研究[J]. 中国新药杂志, 2014, 26(6):706-710.

[10] 贾永艳, 田效志, 李九席,等. 丹参大孔树脂纯化工艺研究[J]. 河南科学, 2012, 30(4):427-430.

[11] 张秋燕, 张盈颖, 崔翰明. 丹参总酚酸类成分的提取纯化工艺和质量研究[J]. 世界科学技术-中医药现代化, 2013, 15(2):299-304.