冬凌草甲素的研究进展开题报告

冬凌草又名冰凌草，为唇形科香茶菜属植物，因其植株凝结薄如蝉翼、形态各异的蝶状冰凌片而得名。在我国广泛分布于黄河和长江流域。通常取其地上部分入药，味苦甘，性微寒，具有清热解毒、消炎止痛及健胃活血等功效，用于咽喉肿痛、急性喉炎、急性化脓性扁桃体炎、慢性支气管炎及咽炎、蛇虫咬伤、对食管癌、贲门癌原发性肝癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌等都有明显的缓解抑制作用，同时还有稳定及缩小肿瘤体，延长肿瘤患者生命的作用[1]。1977年，冬凌草被收入《中华人民共和国药典》，同时编入《全国中草药汇编》。

冬凌草甲素别名冬凌草素、延命草宁，是冬凌草的主要有效成分；为一种贝壳杉烯为骨架的四环二萜类化合物。冬凌草甲素还可以从香茶菜、显脉叶香茶菜、毛叶香茶菜、道孚香茶菜、碎米桠和延命草中提取。

冬凌草甲素难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂。其传统的提取工艺主要为乙醚提取法、乙醇提取法[2]，传统方法需要大量的溶剂，而且操作步骤也不方便，不利于大生产的进行。刑洁等[3]对提取工艺进行了研究，采用超临界二氧化碳-柱色谱分离联用的方法制备冬凌草甲素，不仅产品纯度＞98%，而且操作工艺更简单，省去了传统工艺的活性炭脱色，同时不需要使用大量有机溶剂，更适用于工业化生产。叶红勇等[4]用大孔吸附树脂AB-8分离纯化冬凌草甲素，后甲醇重结晶，冬凌草甲素的纯度达到99.5%。

1、国外研究现状：

根据文献资料报道，冬凌草甲素拥有抗多种肿瘤的作用。据Ikezoe等[5]人的研究可以看出，冬凌草甲素可以抑制多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、成人型T细胞白血病等的细胞的生长；结果显示冬凌草甲素通过抑制了转录因子NF-κB与靶向DNA区段的结合活性，造成白血病MT-1细胞凋亡。冬凌草甲素还能抑制造血细胞Jurkat、巨噬细胞RAW264.7细胞中由TNF-α和LPS刺激诱导产生的NF-κB活性。Zhang等[6]在对肝癌BEL-7402细胞体外研究中发现，冬凌草甲素能以时间、剂量依赖方式抑制其细胞增殖并引发细胞凋亡，在接触60小时后可以观察到凋亡细胞的形态发生明显变化。新近体内外实验表明，冬凌草甲素可抑制胃癌SNU-5细胞株生长，其作用机制可能是通过调节c-Met基因信号通路和抗血管生成[7]。有研究认为冬凌草甲素对人结肠癌HCT8细胞株具有体外抗肿瘤作用， 其作用机制与诱导凋亡有关。Zhu等[8]以人结肠癌HT-29细胞株为研究对象， 通过体内外实验观察冬凌草甲素对HT-29细胞抑制作用，结果发现药物抑制细胞作用有剂量依赖性和时间依赖性，细胞 G2/M期阻滞，可见凋亡小体，可抑制实体瘤生长，认为冬凌草甲素可在体内外抑制肿瘤细胞生长，可通过线粒体损伤途径诱导细胞凋亡。最新体外实验研究以胆囊癌SGC996和NOZ细胞株为研究对象，也证实冬凌草甲素可抑制细胞生长和促进细胞凋亡，其机制与影响线粒体有关；进一步的体内实验提示冬凌草甲素可通过线粒体途径抑制NF-KB核转位和激活caspase-3，caspase-9，PARP-1分裂来增加Bax/Bcl-2比率来诱导细胞凋亡[9]。

Ren[10]研究发现，冬凌草甲素通过诱导鼠黑色素瘤K1735M2细胞产生树突状结构，以剂量依赖的方式影响K1735M2细胞活力，从而抑制鼠黑色素瘤K1735M2细胞的生长，其抑制效应与剂量依赖的G2/M相停止和分化诱导有关。2、国内研究现状：

根据冯长伟等[11]研究，冬凌草甲素能有效抑制白血病细胞K562的生长，而且有明显的时效、量效关系。但是冬凌草甲素其不影响正常人淋巴细胞。朱国臣等[12]的研究则表明冬凌草甲素作用鼻咽癌CNE-2细胞后，使CNE-2细胞处在G2/M期增加，抑制了癌细胞的生长。王允等[13]研究表明，冬凌草甲素对肺腺癌A549细胞具有生长抑制诱导凋亡作用，同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调是冬凌草甲素诱导肺腺癌A549细胞发生凋亡的重要作用机制。

刘军楼等[14]研究表明，冬凌草甲素通过对胰腺癌细胞骨架蛋白F-actin的作用，引起骨架蛋白F-actin的解聚，从而抑制胰腺癌SW1990细胞增殖，促进肿瘤细胞的凋亡。另有报道表明，冬凌草甲素在体外能显著增强吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞的抗瘤效果，其机制可能是通过下调NF-KB及其下游XIAP的表达进而诱导胰腺癌细胞的凋亡而实现[15]。

谢晓原等[16]用不同浓度冬凌草甲素作用于人食管癌SHEE细胞株 ，结果提示冬凌草甲素可诱导SH EE细胞凋亡 ，其机制可能与线粒体凋亡途径有关。有学者进一步研究认为线粒体改变和细胞内Ca2+升高可能是冬凌草甲素诱导食管癌细胞凋亡过程的重要环节。自发现冬凌草甲素具有抗食管癌作用后，有学者应用不同浓度冬凌草甲素作用于人胃癌BGC-823细胞株，结果发现冬凌草甲素可抑制细胞生长、诱导凋亡，认为其凋亡机理与caspase-3的激活，p53蛋白表达上调及cyclinA表达下调相关[17]。季宇彬等[18],以胃癌SGC-7901细胞株为研究对象，予不同浓度冬凌草甲素处理后，结果提示冬凌草甲素通过下调肿瘤细胞内Cdkl、CychnB1两种蛋白的表达，阻滞细胞于G2/M期而抑制细胞生长。在此基础上，又进一步采用冬凌草甲素注射剂处理胃癌SGC-7901细胞，发现药物可通过升高细胞内ca浓度诱导细胞凋亡[19]。

在体外的研究表明，冬凌草甲素可以抑制乳腺癌细胞的增殖，可以诱导乳腺癌Bcap-37细胞凋亡[20,21]、可以诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡[22,23]、可以诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡[24]。崔侨等[25]发现，冬凌草甲素明显抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，诱导其凋亡并发生自噬。冬凌草甲素作用24h后，促凋亡蛋白Bax、细胞色素c和控制Bax活力的去乙酰化酶SIRT-1的表达明显改变。冬凌草甲素诱导的自噬通过影响SIRT-1和线粒体途径蛋白表达下调凋亡。更值得注意的是，冬凌草甲素诱导癌细胞凋亡的浓度不能诱导培养的正常人成纤维细胞凋亡。

    因冬凌草甲素的水溶性差等原因，在其制剂应用中收到较大限制。以冬凌草甲素为先导化合物对其化学结构进行修饰与改造，改变其水溶性、脂水分配系数、解离度、立体结构和电子云密度的分布，获得了不少生物活性较强的衍生物。其主要衍牛物类型：对冬凌草甲素进行7，14-羟基缩酮(醛)反应得到11个化合物；通过冬凌草甲素与胺类化合物发生Michael加成反应制备成Mannich碱类化合物，得到了2个冬凌草甲素芳胺衍生物；冬凌草甲素6位通过糖苷化后，不仅可以改变溶解性和导向性，并且作用方式和作用过程发生了改变；1-酰化冬凌草甲素的衍生物、14-酰化的冬凌草甲素衍生物、冬凌草甲素1-氧化衍生物，其活性均强于冬凌草甲素[26]。

^范文提纲

冬凌草及冬凌草甲素简介

1冬凌草甲素的提取、分离

2冬凌草甲素抗肿瘤作用

2.1抗白血病

2.2抗鼻咽癌、肺癌

2.3抗肝癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、结直肠癌

2.4抗宫颈癌、乳腺癌、卵巢癌等

2.5抗黑色素瘤、皮肤癌

3冬凌草甲素衍生物

三、参考文献

[1]冯卫生，李红伟，郑晓珂，王彦志．冬凌草化学成分研究进展[J]．中国新药杂志，2008，17（23）：2003-2007．

[2]晁金华，赵清治，王汉清，等.冬凌草抗癌有效成分提取流程的部分改革[J]．河南医学院学报，1981，16（1）：286．

[3]刑洁，张典瑞，张学顺，高磊.超临界CO2-柱色谱分离联用的方法制备冬凌草甲素[J]．中国药学杂志，2005，40（23）：1804-1807．

[4]叶红勇，左广玲，李入林.大孔吸附树脂分离纯化冬凌草甲素条件的优化[J]．湖北农业科学，2013，52（17）：4201-4204．

[5]Ikezoe T，Yang Y，Bandobashi K，et al.Oridonin，a diterpenoid purified  from Rabdosia rubescens，inhibits the proliferation of cells from lymphoid malignancies in association with blockade of the NF-κB signal pathways[J]．Mol Cancer Ther，2005，4（4）：578-586．

[6]Zhang J F，Liu J J，Liu P Q，et al．Oridonin inhibits cell growth by induction of apoptosis on human hepatocelluar carcinoma BEL-7402 cells[J]．Hepatol Res，2006，35(2)：104-110．

[7]Liu H，QianC，Shen Z．Anti-tumor activity of oridonin on SNU-5 subcutaneous xenograft model via regulation of c-Met pathway[J]．Tumour Biol，2014，35 (9)：9139-9146．

[8]Zhu Y，Xie L，Chen G，et al．Effects of oridonin on proliferation of HT29 buman colon carcinoma cell lines both in vitro and in vivo in mice[J]．Pharmazie，2007，62 (6)：439-444．

[9]Bao R，Shu Y，Wu X，et al．Oridonin induces apoptosis and cell cycle arrest of gallbladder cancer cells via the mitochondrial pathway[J]．BMC Cancer，2014，21(14)：217．

[10]Ren K K，Wang H Z，Xie L P，et al．The effects of oridonin on cellgrowth，cell cycle，cell migration and differentiation in melanoma cells[J]．

J Ethnopharmacol，2006，103(2)：176-180．

[11]冯长伟，潘祥林，邹俊晖，等.冬凌草甲素对人红白血病细胞系K562细胞生长的抑制作用[J]．山东中医药大学学报，2000，24（3）：225-226．

[12]朱国臣，肖大江，张亚男，等.冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制作用[J]．时珍国医国药，2007，18（4）：804-805．

[13]王允，张玉媛，申玲.冬凌草甲素对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其相关机制的研究[J]．毒理学杂志，2013，03（3）：204-206．

[14]刘军楼，沈洪，徐力，杨继兵，于希忠，孙志岭.冬凌草甲素对胰腺癌细胞骨架蛋白F-acting的影响[J]．中国癌症杂志，2015，25（1）：31-37．

[15]周黎明，卜贺启，刘殿雷，金海敏，周蒙滔.冬凌草甲素联合吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞抑制作用的研究[J]．天津医药，2014，42（9）：859-862．[16]谢晓原，陈俊辉，王少彬，等．冬凌草甲素诱导人食管癌SHEE凋亡及其线粒体改变[J]．现代肿瘤医学，2008，16(6)：907-910．

[17]吴婕，袁守军，杨德宜，等．冬凌草甲素抑制BGC823细胞及MMP-2MMP-9的表达[J]．解放军药学学报，200，23(5)：344-347．

[18]季宇彬，洪宝，高世勇．冬凌草甲素抑制人胃癌SGC-7901细胞生长的G2/M期阻滞机制研究[J]．中草药，2010，12：2024-2026．

[19]季宇彬，江剑，高世勇．冬凌草甲素注射剂诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究[J]．中草药，2010，12：2024-2026．

[20]杜海爽，郭玲玲，顾振纶，蒋小岗，苏晓燕，郭次仪．冬凌草甲素对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制作用及其机制[J]．苏州大学学报(医学版)，2010，30(3)：473-476．

[21]余越美，严巧灵，章康健，岳学田，周秀梅．冬凌草甲素诱导乳腺癌Bcap37细胞凋亡的探索[J]．浙江理工大学学报，2013，30 (3)：377-382．

[22]江永青，熊向阳，余乐涵．冬凌草甲素通过激活caspase途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡[J]．时珍国医国药，2009，20 (6)：1493-1495．

[23]汪茗，章尧，谢向荣，戚之琳，毕富勇．冬凌草甲素通过PI3k/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡[J]． 中国临床药理学与治疗学，2013，18 (2)：161-165．

[24]王海啸，杨大朋，彭延延，唐庆九，马长艳．冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、细胞周期和凋亡的影响[J]．江苏医药，2010，36 (18)：2186-2188．

[25]崔侨，田代真一，小野寺敏，等．冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制[J]．药学学报，2007，42(1)：35-39．[26]冉倩，徐进宜，吴晓明，华维一．冬凌草甲素的研究进展[J]．药学与临床研究，2007，15(2)：91-94．