高效液相色谱在氟苯尼考药物分析上的应用_开题报告

（一）氟苯尼考的研究进展

    1.氟苯尼考的药品信息

    20世纪80年代末，由美国先灵一保雅（Achering-Plough）公司首先研制成功的氟苯尼考（florfenicol）又称作为氟甲砜霉素，是一种优良测兽医专用广谱抗生素，具有广谱抗菌，吸收好，体内分布广，安全高效等等特点，我国于1999年批准该药为国家二类新兽药。

    1.1性状与结构

    纯净的氟苯尼考的性状为结构性粉末，白色或类白色，无臭。通常情况下，在有机溶剂中溶解度较高，溶解在水中的剂型大多数为混悬液。氟苯尼考在二甲基甲酰胺中溶解度极高，溶解于甲醇，溶剂为冰醋酸时略微溶解，水或氯仿时中的溶解度极低。浓度为0.5%的氟苯尼考水溶液的酸碱度大约在4.5-6.5范围内。

    市场上出售的氟苯尼考商品名称（国际通用）多数称之为FLOROCOL和Mrflo.氟苯尼考的化学式为C12H14CI2FNO4S，其相对分子质量为358.22，化学结构式如图：

   1.2药效学

氟苯尼考是属于氯霉素类的广谱抗菌药，与氯霉素和甲砜霉素具有相同的作用机理和抗菌谱，它可以与细菌有效地特异性结合，能够通过降低相关酶的活性从而使肽链延伸受到抑制作用，进而干扰甚至丧失了细菌合成蛋白质的功能。然而，结构的修饰与改造令氟苯尼考与CHL和THI相比，显著增强了安全性和有效性。在机构上，氟苯尼考用氟原子取代了CHL和THI中丙烷链上第3个碳原子位置上的羟基，从而对菌体蛋白的乙酰化反应产生阻碍和抑制作用，进而使氟苯尼考不受相关酶的影响，避免了药物的灭活。因而，氟苯尼考不容易出现由质粒介导的耐药性，并且对于大量含有耐CHL基因的病原体，氟苯尼考依旧敏感。氟苯尼考对于大多数细菌都具有杀灭或抑制作用，同时对于厌氧的革兰氏阳性菌和阴性螺旋体，以及立克次氏体，阿米巴原虫等都具有较为显著的抗菌作用。

   2.氟苯尼考的临床应用

氟苯尼考如今已经广泛投入使用在各种水生动物（包括鱼、虾、蟹、鲍、贝等在内）的养殖业中。氟苯尼考可以显著的预防和治疗各种急性、慢性的细菌性疾病，例如黄尾鱼的假核性巴氏杆菌病及链球菌病、黄尾鱼巴氏杆菌感染等。

在猪的养殖业中，在预防和治疗猪喘气病、胸膜肺炎与沙门氏菌病，包括大肠杆菌性下痢、萎缩性鼻炎以及猪丹毒等在内的疾病中，氟苯尼考具有显著的防止效果。

氟苯尼考同样广泛地用于预防和治疗牛的细菌性疾病，且防治效果是其他同类药物所不能及。

氟苯尼考的检测方法

    目前，用于检测动物性食品中氟苯尼考含量的方法主要使用气象或液相色谱与色谱质谱联用法，其中高效液相色谱法与液相色谱-质谱联用法最为广泛。当然，根据条件、目的、用途的不同，目前也常用其他的氟苯尼考检测方法，其中主要有电位法、分光光度法、酶联免疫吸附法、胶束电动毛细管色谱法等。

    1.气象色谱与液相色谱法

使用GC与LC法进行氟苯尼考的含量测定时，溶解样品氟苯尼考药物或提取样品中氟苯尼考的药物残留的主要提取液通常使用乙酸乙酯与甲醇、以及乙腈和丙酮等有机溶剂，其中，以乙酸乙酯的提取效率最高。通常的固相萃取柱有C18柱、HLB柱、MCX柱或Florisil柱等。

在使气象色谱阀分析之前，需要进行样品前处理反应-硅烷化和酰化，以此来生成热稳定性强并且容易挥发的衍生物，通常需要使用氢火焰离子检测器或电子捕获检测器来检测衍生化反应完成之后的样品。

使用液相色谱法检测时，色谱柱通常使用的是C18柱，检测器通常使用二极管阵列检测器(PDA）紫外检测器（UVD）或者荧光检测器（FLD）。相比于其他的分析方法，高效液相色谱法操作简便，定量准确，结果稳定且消耗时间段。

2气相色谱-质谱联用法（GC-MS）和液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS)

气象色谱-质谱联用法与气象色谱法一样，需要进行衍生化过程，但需要避免水分的出现，水的存在会降低衍生化的效率，生成的产物不稳定。因此，使得GC-MS法的前处理过程极为复杂。

    3电位法

电位法要将样本在乙醇中溶解，再加入氢氧化钠溶液进行加热回流，经稀释后，加入稀硝酸，然后使用银-玻璃电极进行滴定。电位法是电化学分析领域的主要研究方向之一，该方法定量稳定而准确，但由于其消耗时间过长，操作较为繁琐，不适合快速的分析检测。

4分光光度法

    由于氟苯尼考在紫外洸区具有吸收的特性，可以通过浓度与在特定波长处氟苯尼考的光吸收度之间的关系，来计算和分析氟苯尼考的含量。使用分光光度法检测分析操作简便，消耗时间短，但由于干扰因素比较多，造成分光光度法的准确度较低，并且专属性较差。

5酶联免疫吸附法

    酶联免疫吸附法是一种优秀可靠的分析检测方法，该方法的理论基础是应用了抗原与抗体基友可逆性的特异性结合反应，效果明显。近几年来，国内市场已经发行了试剂盒应用于氟苯尼考的含量测定，这些试剂盒的灵敏度较高，检测浓度最低可以达到0.5ppb。酶联免疫吸附法具有着灵敏度较高、特异性强、并且操作简便、耗时较短，定量与结果准确而稳定等特点和优点，该方法需要进行抗原与抗体的阳性确定。

    6胶束电动毛细管色谱法

    胶束电动毛细管色谱法是通过在缓冲溶液中加入各种表面活性剂，从而形成带电荷的胶束。胶束电动毛细管色谱法把色谱技术与电泳技术有机结合起来，吸取两种方法的优点。该方法既克服了毛细管区带电泳法（CZE）难以分离中性离子的不足，又能弥补高效液相色谱法（HPLC）无法同时测定复杂成分中的中极性粒子和非极性粒子的缺陷，能够在较短时间内完成复杂组分的分离测定

二、^范文提纲

1.绪论

1.1高效液相色谱

1.1.1高效液相色谱技术简介及其特点

1.1.2国内外研究现状和其前景

1.2氟苯尼考药物

1.2.1氟苯尼考药品信息及其临床应用

1.2.2其他检测方法

1.3研究目的和意义

1.4研究内容

2.实验部分

2.1材料和设备

2.1.1药品和试剂

2.1.2仪器

2.2实验方法

2.2.1高效液相色谱测定方法

2.2.2样品测定

2.2.3标准曲线绘制

2.2.4稳定性实验

2.2.5变异系数

2.3结果与计算

2.3.1HPLC色谱图

2.3.2标准曲线

2.3.3稳定性实验

2.3.4变异系数

2.4讨论

2.4.1流动相的选择

2.4.2检测波长选择

3.结论与建议

3.1实验结论

3.2创新点

3.3有待进一步研究的问题

参考文献

致谢

参考文献

【1】邱银生，吴佳。兽用广谱药物氟苯尼考(J).中国兽药杂志，1996,30（2）：47~48

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【4】张立军.戎江瑞.齐敏 高效液相色谱法检测鱼中的氟苯尼考残留量【期刊^范文】-中国卫生检验杂志2007（3）

【5】傅若农 近年国内固相萃取-色谱分析的进展【期刊^范文】-分析实验室

【6】卢运战.祁克宗.朱良强 动物性食品中氟苯尼考残留分析【期刊^范文】-上海畜牧兽医通讯2006（5）

【7】化学工业出版社 分析化学手册第六册 第二版 2016年10月1号

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【9】夏玉宇 化学工业出版社 化验员实用手册（第二版）2005，【9787502563400】

【10】张向宇 实用化学手册 1986，【7-118-00424-3】