高效液相色谱-质谱联用技术在中药成分分析中的应用概况开题报告

概述

中药包括中药材、中药饮片、中药提取物和中成药，其功效已为几千年的历史和现代临床疗效所肯定。当今世界在“回归自然”思潮的影响下, 许多国家寻找天然药物的呼声日渐高涨, 而中药以其丰富的资源、独特的疗效等特点, 已引起世界各国的关注。

近年来中药分析领域取得了非常大的进展, 主要特点有: 中药分析的对象更集中于针对中医药现代化研究中的关键科学问题, 提出切合实际的系统的解决方案; 中药分析不再局限于提供化学分析的工具, 而是将各种新方法、新技术整合使之成为解决关键科学问题的新体系; 中药分析已经不再局限于分析中药的物质组成, 更注重解决的是物质的组成及其功能的相关性[1]，主要采用以仪器分析为主的分析技术,包括高效液相色谱、薄层色谱、气相色谱、超临界流体色谱、高效毛细管电泳、红外光谱与拉曼光谱、原子吸收光谱、核磁共振、质谱及其联用技术(气质联用、液质联用、电感耦合等离子体2质谱)等。本次^范文就高效液相色谱-质谱（High-performance liquid chromatography-mass spectrometry， HPIC-MS）联用技术在中药成分分析的应用作为切入点，对其最新的应用概况作一综述。

高效液相色谱-质谱联用技术的应用研究

高效液相色谱-质谱（High-performance liquid chromatography-mass spectrometry， HPIC-MS）联用技术正处于快速发展阶段。质谱检测器具有更高的灵敏度，样品用量少，分析速度快，应用范围广，在选择合适电离方法的前提下，一般化合物都能被电离得到检测，从而能获得更多的化合物结构信息。《中国药典》[2]首次将HPLC-MS用于重要的含量测定。高效液相色谱法是一种非常有效并普遍实用的中药分析方法, 可用于高分子、极性、离子和热不稳定性化合物的分离分析。HPIC-MS联用技术具有集液相色谱的高分离与质谱的高灵敏度，极强的定性专属性于一体的优势，为中药成分分析提供了一种更高效、更可靠的方法。

1977年，LC-MS开始投放市场；1978年，LC-MS首次用于生物样品中的药物分析；1989年，LC-MS-MS取得成功；1991年，API LC-MS用于药物开发；1997年，LC-MS用于药物动力学筛选；1999年，API Q-TOFLC-MS-MS投放市场，大气压离子化接口的应用，彻底改变了面貌，使其迅速成为制药工业中应用最广的分析仪器[3]。

国内研究

中药指纹图谱技术

中药指纹图谱技术是采用现代化的分析技术和手段建立, 能够测定中药材或中成药共有的、具有特异性的某类或几类成分的色谱或光谱信息的图谱。HPLC方法非常适合中药复杂体系的分析及其指纹图谱的建立, 是目前中药指纹图谱研究中应用最广泛的方法。HPLC- MS联用技术随着接口技术的成熟和质谱检测器离子源种类的增多, 逐渐在中药指纹图谱的研究中得到广泛应用。张尊建[4]等采用 HPLC-UV-MS 法对密花石斛进行指纹图谱研究，标示了9 个共有峰，对其部分色谱峰进行了初步定性，有泽兰内酯、鼓槌联苄、大黄素或芦荟大黄素等。此外，他们[5]还采用 HPLC-UV-MS 法对忍冬和山银花药材进行指纹图谱的研究，确认了忍冬指纹图谱中的8 个色谱峰( 熊果酸、绿原酸、十三烷酸、香芥酚、corymbosin、3- 甲基-4- 羟基肉桂酸、异绿原酸、丁香酚等) 和山银花图谱中的5 个色谱峰( 绿原酸、香芥酚、丁香酚、异绿原酸、咖啡酸等)，并比较了2种药材指纹图谱的差异。

中药未知成分鉴定分析

除了作为应用于中药指纹图谱技术最广泛的方法之外，在对中药未知成分的研究中，采用HPLC-MS联用技术，质谱检测器可以给出大量的结构信息，结合同类已知结构化合物的裂解规律，或结合其它检测方法，即可对未知成分结构进行直接分析。

郭继芬等[6]选用DiscoveryC18柱, 以甲醇-水-甲酸(40B60B0.025) 为流动相, 经紫外检测后, 在ESI- 扫描方式下, 对HPLC- UV图谱中各色谱峰进行一级和二级质谱分析, 与对照品比较鉴定了提取物中4个已知的黄酮类化合物, 推断出3个未知黄酮苷类化合物可能的结构。现代药理学研究表明，柴胡中柴胡皂苷类成分含量最高，具有解热、镇静、镇咳等作用，其中，柴胡皂苷A和D药理活性最强。刘密新[7]等在KromasilC18柱上用乙腈和水梯度洗脱，采用正离子扫描方式、电喷雾法等质谱条件检测到由黄连、柴胡等11味药材精制而成的中药复方中柴胡皂苷A和D的3个同分异构体。

中药定量分析

中药指标成分定性定量分析是中药信息表达中的重要内容。由于缺乏相应的理论指导, 缺乏相应的化学成分和药效药理研究基础, 所测定的成分的特征性和系统性不能保证, 往往很难对药材或制剂的特性有一个全面的描述。基于分析技术和方法的不断发展, 进行了多指标成分定性定量的研究。目前应用最广泛的技术和方法就有高效液相色谱-质谱分析法。

张萍等[8]采用HPLC法测定18份细辛属药材、7分马兜铃属药材中马兜铃酸A的含量，流动相为甲醇-水-醋酸（60:36:4），流速1.0mL/min，柱温20℃，检测波长316nm；同时采用HPLC-MS法对细辛中马兜铃酸A进行结构确认。结果马兜铃酸A的平均回收率为97.5%，RSD为1.8；色谱图中保留时间为9.036min的色谱峰，以及从质谱图得到m/z为339的[M-H]-峰，确认为马兜铃酸A。徐智秀[9]等采用惠普公司Hypersil ODS 色谱柱，以乙腈一水梯度洗脱, 分离出9 种人参皂甙，用二极管阵列检测器检测并在202nm下提取色谱图。利用三极四极质谱研究了9 种人参皂甙的一级质谱和二级质谱，采用内标、外标法对人参皂甙进行了定量分析。

国外研究

相对与国内对中药的研究，国外使用该技术方法对植物药及中成药研究得更为广泛。Miketova 等[10]利用 HPLC-ESI-MS 技术对绿茶提取物直接进行分析，结合不同化合物的相对分子质量和保留时间信息，可对所含的儿茶酸类进行有效鉴定。He等[11]同时利用 HPLC-MS和HPLC-DAD成功地对姜的辛辣成分与含油树脂提取物进行了成分分析，根据紫外吸收光谱和质谱结果，成功地鉴定了其中7个化合物结构，并分析推测了其他2个未知成分的结构。Ndjoko等[12]利用HPLC-TSP-MS 并结合 HPLC-TSP-MS-MS 方法对大麻树脂提取物中的大麻酚类进行定性分析，在3份不同的大麻树脂提取物样品中，共鉴定分析了Δ9THC(m/z3l5) 等l1个成分。

小结

目前，HPIC-MS联用技术飞速发展，已成为一种常规的应用技术。HPLC-MS 以其灵敏、快速的特点，在对含量低、不易分离得到或缺乏特征紫外吸收的物质的分析中显示了独特的优势，这决定了它在中药成分分析中具有广阔的应用前景。随着这一技术的进一步发展与普及，必将大大加快我国中药现代化的研究进程。

二、^范文提纲

1现代中药分析进展

2高效液相色谱-质谱联用技术的发展

2.1 国外发展

2.2 国内发展

3 高效液相色谱-质谱联用技术在中药成分分析中的应用

3.1 中药指纹图谱的新进展

3.1.1 单味中药指纹图谱研究

3.1.2 复方中药指纹图谱研究

3.1.3 多维指纹图谱

3.2 中药成分定性定量分析

3.2.1已知成分定性分析及结构鉴定中的应用

3.2.2未知成分定性分析中的应用

3.3 中药毒性成分的分析

4 社会评价

4.1目前存在的问题

4.2展望

三、参考文献

[1] 夏建飞, 梁琼麟, 罗国安. 现代中药分析新进展[J] 中国科学: 化学, 2010年 第 40 卷 第 6 期: 641-650.

[2] 国家药典委员会.《中国药典》（2010年版）一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[3] 卿大放.液相色谱一质谱联用法在药物研究中的应用[J].世界科学技术一中医药现代化.2003,5(5):44-47.

[4] 张尊建等.忍冬、山银花HPLC/UV/MS指纹图谱研究[J].中成药,2003,25(11):863-865.

[5] 余静等.刺五加HPLC/UV/MS指纹图谱研究[J].中国药科大学学报,2003,34(2):148-150.

[6] 郭继芬,陈四平,乔善义,等.黄芩总黄酮提取物的HPLC-MS-MS分析[J].药物分析杂志,2005,25(3):267-269.

[7] 刘密新,吴筑平,杨成对，等.中药复方中柴胡皂甙A和D的LC-MS-MS研究[J].质谱学报,2000,21(4):77-78.

[8] 张萍，冉海琳，肖新月，等.细辛类植物中马兜铃酸A的定性及定量分析[J].药物分析杂志，2006,26(6):811-814.

[9] 徐智秀等.高效液相色谱-质谱-质谱法分析人参皂甙.色谱[J].2000, 6(18):521-524.

[10] Miketobva P, Schram KH, Whitney JL, et al. Mass spectrometry of selected components of biologibal interest in green tea extracts[J].J Nat

Prod, 1998, 64(4):461-467

[11] He XG, Bernart M, lian L, et al. High-performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometric analysis of pungent constituents of ginger[J].J Chromatogr A,1998,796(2):327-334

[12] Ndjoko K, Wolfender JL, Hostettmann K.Analysis of cannabionoids by liquid chromatography-thermospray mass spectrometry [J]. Chromatographia, 1998, 47(12):72-76