山楂叶总黄酮的药理作用及其缓释制剂的研究进展_开题报告

1、山楂叶总黄酮的国内外研究现状

1.1 药理作用

现代研究表明，山楂叶总黄酮具有抗动脉粥样硬化、抗氧化、降血糖、抗血小板凝聚等药理作用。其中提高组织中抗氧化酶的活性，抑制自由基损伤，防止脂质过氧化的抗氧化作用显得尤为突出和重要，占当前医学研究领域前三位的肿瘤、冠心病和衰老均与自由基引起的脂质过氧化有关。山楂叶总黄酮的药理作用是互相交叉、相辅相成的。比如山楂叶总黄酮抗氧化作用对动脉粥样硬化也起着积极的作用，降血糖的作用则延缓了糖尿病患者并发高脂血症的进程，抗血小板凝聚又对缺血性损伤的组织起着一定的保护作用[3]。

1.1.1 抗心肌缺血及再灌注损伤

    有抗心肌损伤作用的药物对CPK、LDH都呈现保护作用。通过对复制出大鼠心肌缺血再灌注损伤的模型观察表明，山楂叶总黄酮能显著提高大鼠血清和心肌组织中超氧化物歧化酶活性，降低心肌和血清脂质过氧化代谢产物丙二醛含量[4]。山楂叶总黄酮提高大鼠心肌缺血再灌注后血清中NO含量，使MDA含量降低，保护血管内皮[5]。 

1.1.2抗动脉粥样硬化

 鞠晓云等[6]报道山楂叶总黄酮可扩张冠脉血管，增加冠脉流量和冠状静脉窦血氧含量，改善心肌的血氧供应，对心血管系统起到调整和改善作用；叶希韵[7]发现山楂叶总黄酮能使血管内皮细胞减少乳酸脱氢酶的泄露，降低细胞脂质过氧化程度，从而阻止动脉粥样硬化的发生和发展。通过给犬口服山楂叶提取物后，心肌血流量明显增加并能维持数小时，且呈剂量依赖性，这可能是由于舒张冠脉血管引起心肌血流量增加[8]。

1.1.3 降低血脂

杨宇杰等[9]采用维生素D3加脂肪乳剂造成大鼠高血脂症模型，发现山楂叶总黄酮可降低糖尿病小鼠血清中血糖、丙二醛、总胆固醇、甘油三酯、山梨醇和大脑脂褐质水平，升高血清高密度脂蛋白—胆固醇。山楂叶总黄酮可明显降低高脂血症大鼠血清TC、TG、纤维蛋白原的量、全血比黏度、RBC聚集指数和RBC压积并使动脉粥样硬化指数显著降低。

1.1.4 对脑缺血及再灌注损伤的保护作用

纪影实等[10]发现HLF高中剂量组可明显降低采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)的神经行为评分，HLF可增高血清中SOD活性、降低MDA 含量．说明该药可增强机体对自由基的清除能力，减轻细胞膜脂质过氧化损伤，可明显降低血清中CK、LDH 的活性，说明该药可减轻细胞膜的损伤程度，降低细胞膜通透性，具有膜稳定性。张晓丹[11]选用结扎双侧颈总动脉、迷走神经作为小鼠脑缺血的模型时，HLF能明显延长小鼠生存时间，其脑组织匀浆中LD、MDA含量明显下降，SOD活性明显升高。

1.1.5 对脑出血后的保护作用

张晓丹等[12]应用立体定位技术，自大鼠尾动脉取不抗凝血液50 缓慢注入尾状核，建立大鼠实验性脑出血模型，心酮注射液可明显降低出血脑组织的脑水分含量，明显改善神经行为，减轻脑组织病理改变，并可升高血浆及脑组织匀浆中SOD活性，降低血浆及脑组织匀浆中MDA及NO含量。

1.1.6 降血糖作用

目前认为糖化血清蛋白(FA)和山梨醇是检测糖尿病并发症的重要指标之一。四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠经饲喂山楂叶总黄酮，FA和山梨醇水平明显降低，血糖水平降低。此结果证明了山楂叶总黄酮降血糖的功效。这为山楂叶总黄酮将来进一步在糖尿病及其并发症的防治研究提供了一定的实验基础[13]。

1.1.7 抗血小板凝聚的作用

焦利萍[14]通过给大鼠皮下注射大剂量肾上腺素和冰水浸泡法引发模型组大鼠的全血高、低切黏度值和血浆黏度值的显著升高，迅速复制出血流变性呈粘稠状态的急性血瘀证模型。而在饲喂山楂叶总黄酮后能显著降低纤维蛋白原的量，降低全血比黏度、血浆比黏度、血清比黏度，降低RBC（红细胞）聚集指数和RBC压积，而且可明显抑制花生四烯酸和二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集，且呈剂量依赖性。此实验结果说明，山楂叶总黄酮能够改善血淤状态，即证实了中医药文献对其所描述的“活血化淤”的作用。

1.2 动力学研究

山楂叶总黄酮的主要活性组分为芦丁、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素和金丝桃苷，可以以原型在胃肠道被吸收，但吸收稍差，各组分的吸收转化具有部位差异性，结肠和盲肠是各组分吸收代谢的主要部位，吸收过程伴随着肠道菌群代谢，胆汁排泄、肠道分泌和肠肝循环现象；各组分可被载体介导转运，能够依靠Na+依赖—葡萄糖转运体1(SGLT1)实现在小肠的吸收转运，各组分均是P-gp的底物，与盐酸维拉帕米和地高辛等P-gp抑制剂合用，其外排被抑制，吸收得到改善；十二烷基硫酸钠、牛胆盐等吸收促进剂可显著改善各组分的吸收。山楂叶总黄酮与利福平合用时可能发生胆盐转运蛋白(BSEP)介导的药物相互作用，通过抑制胆汁的排泄而增加山楂叶总黄酮各组分的吸收[15]。

2、缓控释制剂的研究概况

国外的缓控释制剂研制开始于20世纪50年代末，我国于20世纪70年代末和80年代初开始有专家队伍致力于研制缓控释制剂技术。经过几十年的发展，以化学药为原料药的缓释制剂在药代动力学设计原理、辅料、成型工艺以及生物药剂学特性等方面进行了大量的研究，也有许多成熟的品种如氨茶碱缓释片、新康泰克等广泛应用于临床。中药缓释制剂与化学药缓释制剂比，起步较晚，发展也较慢，尚处在初级阶段，但近年来，中药复方缓控释制剂的研究报道逐年增加，研究广度和深度显著加强。开展中药缓释制剂的研究有利于提高中药的疗效，降低不良反应，改变中药传统剂型落后的特点，有利于新材料、新设备、新工艺和新药物载体在中药中的应用，为中药新药的研究和开发提供途径，有利于中药的创新和提高中药研发水平。因此，中药缓控释制剂研究已成为当前中药制剂研究的前沿和热点。

目前，已有一些中药有效成分、有效部位及一些中药复方正在开展中药缓释制剂的研究，这些药物之所以选择缓控释制剂一般从下面两个方面考虑：一是从临床适应症上，主要以病情较重、病程较长、需要长期服药的慢性疾病为主，其中以抗癌、抗肿瘤药物居多。二是从中药的有效成分或有效部位具有生物半衰期短，在胃肠道有特定的吸收部位，用药剂量窄，毒副作用大或者生物利用度低等生物药剂学的特性上考虑，需要制备成缓释制剂[16]。

胡容峰等[17]利用固体分散载体和阻滞性高分子材料，采用固体分散与球晶制粒相结合的技术成功地制备了水飞蓟宾缓释微球，工艺简便，具有良好的重现性。魏凤环等[18]以乙基纤维素(EC)、羟丙甲基纤维素(HPMC)为缓释辅料。采用固体分散技术制备的葛根黄酮缓释胶囊，在0.5 h内有一明显的突释，Q0.5 h=50 %-53 %，到12 h的累积释放达100 %。刘宏等[19]通过固体分散技术，以硬脂酸为骨架材料，以聚乙二醇为致孔剂，通过选用适当的药物与辅料比，制得灯盏花素缓释滴丸。李学明等[20]以乙基纤维素为载体，制备难溶性药物灯盏花素的固体分散体。

3、固体分散技术

固体分散体是指药物以分子、胶体、无定型或微晶等状态均匀分散在某一固体载体中所形成的分散体系。固体分散技术是将药物均匀分散于固体载体的技术。制剂中难溶性药物的释放吸收与药物的分散状态关系极为密切，对其释放一吸收影响很大，以一般的粉碎方法制得的粗分散状态的粉末，往往生物利用度很低。这就需要通过改变剂型、处方组成和工艺过程等方法来改变药物的分散状态，或通过改变用药途径来达到提高药物生物利用度的目的。难溶性药物的固体分散技术，目前主要有：药物微粉化、制成粉状溶液或溶剂沉积物、制成固体分散体三大类[21]。

3.1 固体分散体的作用特点

固体分散体中，难溶性药物以分子、胶体、无定型或微晶状态分散在载体中，比表面积增加，这种高度分散状态可以增加难溶性药物的溶解度和溶出速率，提高生物利用度；若选用适宜的载体材料如不溶性聚合物、肠溶性材料、脂质材料等可以延缓药物的释药速度，获得理想的缓释制剂；不稳定药物制成固体分散体后，可以提高药物的稳定性，使制剂的质量易于控制并可降低成本。

3.2 固体分散体的载体材料

3.2.1 水溶性载体

水溶性载体材料是制备速释型固体分散体的常用载体材料，包括聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆(Poloxamer)188、尿素、有机酸、糖类和醇类物质等。常用的水溶性载体，毒性小，且在溶剂蒸发过程中粘度增大，可阻止药物聚集。目前已有将PEG与其它载体配合应用于缓释制剂的研究。

3.2.2 难溶性载体

以难溶性载体材料制成固体分散体，可使药物具有缓释性，常用载体材料有乙基纤维素(EC)、含季铵基团的聚丙烯酸树脂Eudragit系列及脂质类载体。最近有文章报道，二氧化硅也可用于制备固体分散体，因其具体类型不同而对释药速率具有不同的调控作用。难溶性载体材料中常加入一些水溶性物质如PVP、PEG、十二烷基磺酸钠(SDS)和糖类等调节药物释放速率。

3.2.3 肠溶性载体

常用的肠溶性载体材料有醋酸纤维素酞酸酯(CAP)、羟丙甲纤维素酞酸酯(HPMCP)、聚丙烯树脂(如EudragitL、EudragitS)等。这类固体分散体具有较好的化学物理稳定性。其缓释作用主要靠给药后的延迟吸收来实现，而药物吸收延迟决定于制剂通过胃肠道的转运时间。

3.3 固体分散体的制备方法

固体分散体常用的制备方法有熔融法、溶剂法、溶剂一喷雾(冷冻)干燥法等，还可利用共熔原理，用研磨法形成低共熔混合物，以及药物溶于有机溶剂分散吸附于惰性材料(如二氧化硅)形成粉状溶液。熔融法简易、经济，适用于对热稳定的药物；溶剂法适用于对热不稳定或易挥发的药物；溶剂一熔融法可适用于小剂量(如50 mg以下)的液体药物；溶剂一喷雾干燥法生产效率高，可连续生产，溶剂一冷冻干燥法制得的固体分散体尤适用于对热敏感的药物，稳定性好，但工艺费时，成本高。

中药缓释技术是药剂学的前沿课题。本项目就心血管系统天然药物山楂叶总黄酮的现代缓释剂型进行前沿探索，将山楂叶总黄酮选择良好的缓释载体材料，采用固体分散新技术制成缓释固体分散体胶囊，减少服药次数，大大提高病人的顺应性；血药浓度更加平稳，降低药物的毒副作用，提高治疗效果；允许病人作为门诊病人接受药物治疗，降低治疗费用。山楂叶总黄酮作为一种天然植物提取物，具广泛的药理作用和低毒安全的特性，目前尚未见其缓释胶囊研究的相关报道，研究其缓释胶囊具有很好的应用前景。

二、^范文提纲

1研究背景及意义

1.1研究背景

1.2研究意义

2研究的基本内容及基本思路

2.1 建立分析方法

2.1.1 对照品溶液制备

    精密称取经120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品25 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，用乙醇至刻度，摇匀。精密量取20 mL，置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得每1 mL中含无水芦丁0.20 mg的溶液。

2.1.2检测波长的确定

    精密量取上述对照品溶液 6 mL，置25 mL量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液l mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外一可见分光光度法(2010年版《中国药典》一部附录V A)，在450-600 nm范围内进行扫描，确定最大吸收波长。

2.1.3标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液 l mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分别置25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5％亚硝酸钠溶液l mL，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液l mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（2010年版《中国药典》一部附录V A），在最大吸收波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程。

2.1.4稳定性试验

    精密量取芦丁对照品溶液6ml，置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法，自“加5％亚硝酸钠溶液1mL”起操作，放置0、1、2、4、8和24h，依法测定吸光度，计算吸光度的RSD值。

2.1.5精密度试验

    精密量取芦丁对照品溶液6ml，置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法，自“加5％亚硝酸钠溶液1mL”起操作，依法测定吸光度6次，计算平均吸光度和RSD值。

2.1.6重复性试验

    精密称取统一样品6份，照供试品制备方法，制备供试品溶液。精密量取6ml，置25ml量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法，自“加5％亚硝酸钠溶液1mL”起操作，依法测定吸光度，计算供试品溶液总黄酮的平均含量和RSD值。

2.1.7回收率试验

    精密称取FMCL适量，加水溶解，制得浓度为1mg/mL的对照品溶液。另精密称取处方量50%、75%和100%的FMCL，加入处方量辅料，分别用水溶解，制得3种不同浓度的溶液。分别精密量取上述溶液6 mL，照标准曲线绘制项下的方法，自“加5％亚硝酸钠溶液1mL”起操作，计算平均回收率和RSD值。

2.2确定胶囊最佳处方辅料及其用量

    处方筛选：药物粉体流动性参数是固体制剂质量评价的重要指标，也是处方筛选的依据。将山楂叶总黄酮缓释固体分散体与适宜的辅料混合，通过粉末振实密度计测定休止角和每次轻敲后体积减少度C，代入川北方程：n/C＝n/a+1/ab，计算最终体积减少度a和充填速度常数b。以休止角θ、最终体积减少度a、充填速度常数b为指标（θ越小，流动性越好；a越小，振动和压缩流动越好；b：反映粉体的充填特性，越大，充填速度越大，充填越容易进行），确定最佳辅料及其用量。

2.3 制备山楂叶总黄酮缓释胶囊

     将固体分散体与适宜的辅料混合，填充胶囊，得山楂叶总黄酮缓释胶囊。

2.4山楂叶总黄酮缓释胶囊质量总体评价

2.4.1 测定释放度，建立动态数学模型：分别在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12 h时测定胶囊体外释放度，分别采用零级方程、一级方程、weibull、Higuchi、Ritger—Peppas和Hixson—Crowell数学模型对体外释放数据进行释放动力学方程拟合，以各模型的拟合方程预测各时间点的累计释放百分率，并与实测值比较，计算AIC值及最大相对偏差。以各拟合方程的r值（越接近1越好）、AIC值（越小越好）及最大相对偏差（越小越好）确定山楂叶总黄酮缓释固体分散体胶囊体外释放的最佳模型，考察药物释放速率、释放规律及释放机制，证明药物的有效性，优效性。

2.4.2鉴别：取胶囊内容物，研细，取0.2 g，加乙醇5 mL，摇匀，超声处理5 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取芦丁对照品、金丝桃苷对照品。分别加乙醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（药典附录 Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各1 uL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丙醇-水（7:5:6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，吹干，放置1 h后，置紫外光灯（365 nm）下检视供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上的荧光斑点。

2.4.3 水分：取供试品内容物，照水分测定法（2010年版《中国药典》一部附录Ⅸ H）测定，除另有规定外，不得过9.0%。

2.5.4 装量差异：照2010年版《中国药典》一部（附录VI）测定：取供试品10粒，分别精密称定重量，倾出内容物（不得损失囊壳），用小刷拭净，再分别精密称定囊壳重量，求出每粒内容物的装量。每粒的装量与平均装量相比较，装量差异应在平均装量的±10%以内，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍。

2.4.5 含量测定：取缓释胶囊20粒，精密称定，取内容物，研细，精密称取75 mg，置50 mL量瓶中，加乙醇适量，超声30 min，放冷，加乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 um）滤过，精密量取续滤液5 mL置25 mL量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法，自“加水至6 mL”起依法测定吸光度，代入标准曲线计算供试品溶液中芦丁的含量，计算缓释胶囊的总黄酮含量。

2.4.6考察缓释胶囊的释药机制：缓控释系统按照构造及所用辅料的性质可分为膜控型、渗透泵型和骨架型等，骨架型缓控释系统又可分为整块骨架系统、溶胀型骨架系统和溶蚀型骨架系统[13] 。

溶胀型骨架系统拟合：药物的扩散机制可用Peppas方程[14]Q=ktn表示，对于圆柱体骨架，当n=0.45时为Fickian扩散机制；当 n=0.89时为溶蚀控制机制；当0.45<n<0.89，扩散、溶蚀双重机制，称为异常扩散[13]。

     溶蚀型骨架系统拟合：释放模型分为降解控释机理（用Hopfenberg方程：Q=1-(1-kt)2描述）及扩散控释机理（用Higuchi方程：Q = kt1/2描述）[15]

3 解决的主要问题：确定胶囊最佳处方辅料；山楂叶总黄酮缓释胶囊的制备；研究缓释胶囊的体外释放度测定方法；拟合释放动力学方程；检测胶囊的质量。

 

 

三、参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[S]. 北京:中国医药科出版社,2010:30

[2]侯桂兰,高 敏,童丽姣等.山楂叶总黄酮的理化性质研究[J].中华中医药学刊,2012,30(8):1766-1767

[3]王 芳.山楂叶总黄酮的药理作用[J].浙江中医药大学学报,2010,34(2):295-296

[4]闵清,白育庭,舒思洁,等.山楂叶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J]冲药药理与临床,2005,21:19-21

[5]闵清,白育庭.山楂叶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的心电图、一氧化氮及丙二醛变化的影响[J] 中国临床药理学与治疗学,2007,12(7):800—803

[6]鞠晓芸,方泰惠,张文通.山楂叶总黄酮冻干粉对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死的影响[J].南京中医,2005,21(6):381-383[7]叶希韵,王耀发.山楂叶总黄酮对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用[J].中国现代应用药学杂志,2002,19(4):267-268

[8] Roddewing C,Hensel H.Reaction of local myocardial blood flow in nonanes the tized dogs and an esthetized cats tooraland parenteral application of a Crataegus fraction(oligo meric  procyanidin )[J].Arzneimitte  Iforschung,1977,27(7):1407-1410

[9]杨宇杰.山楂叶总黄酮对高脂血症大鼠血管功能损伤的保护作用[J].中草药,2007,38(11):1687           [10]纪影实,张晓丹,李红,等.山楂叶总黄酮对脑缺血的保护作用[J].吉林大学学报(医学版),2005,31(6):879-882

[11]张晓丹.山楂叶总黄酮对小鼠脑缺血的保护作用研究[J].江西医药,2009,44(9):865-866

[12]张晓丹,纪影实,李红,等.益心酮注射液对大鼠实验性脑出血后的保护作用[J].哈尔滨医科大学学报,2006,40 (5):358-361

[13]叶希韵,张隆,沈菊,等.山楂叶总黄酮对糖尿病小鼠糖脂代谢的影响[J].中草药,2005,36(11):683-1687[14]焦利萍.山楂叶总黄酮对急性血淤模型大鼠血液流变学指标的影响[J].中国医药与临床,2008,8(1):49-50

[15]马 国.山楂叶总黄酮吸收机理与吸收调控研究.四川大学博士学位^范文:1-2

[16]许海玉,张铁军,赵平,等.中药缓控释制剂的研究现状及研发思路[J].药物评价究,2010,33(1):30-35

[17]Hu RF,Zhu JB,Ma FY,et a1.Preparation of sustained-release silybin microspheres by spherical  crystallization technique[J].J Chin Pharmaeeu Sci,20061,5(2):83—91

[18]魏凤环,田景振,王永刚.葛根黄酮缓释胶囊的配方筛选与制备[J].中药材,2005,28(2):134-137

[19]刘宏,杨祥良,周林珠,等.灯盏花素缓释滴丸的制备及其体外释放特性的研究[J].药学服务与研究,2004,4(1):30-32

[20]李学明,张柯萍,陈国广,等.灯盏花素固体分散体缓释胶囊的制备及犬体内外相关性研究[J].中国医药工业杂志,2006,37(7):467-470

[21] 王小雷.替米沙坦微粉化及增溶作用的研究.天津大学工程硕士学位^范文,2008:4-5