龙胆中有效成分不同提取方法对比研究开题报告

（一）龙胆的简介

龙胆科植物在我国广泛分布且很多种类具有重要的药用价值，药用资源开发潜力巨大。但多数种属至今其化学成分尚未被系统研究。中国药典2010版记载中药龙胆的原植物为龙胆科龙胆属植物条叶龙胆(Gentiana mamhuri-ca)又称东北龙胆、三花龙胆(Gentiana triflora)、龙胆(Geatiana scabra)又称糙龙胆、滇龙胆（Gentiana rigescens）又称坚龙胆。前3种常被称为关龙胆，其主要产区位于内蒙古、黑龙江、辽宁、吉林、湖北、湖南、浙江等地亦有分布。国外分布于日本、朝鲜等地。而滇龙胆仅在中国有分布，是云南重要的本土药材。除云南外，贵州、四川、广西等省区也是龙胆的分布区。

（二）龙胆的化学成分

1 环烯醚萜类

   环烯醚萜类是一种特殊的单萜。此类物质具有多种生物活性，是中草药中一类重要的化学物质。裂环烯醚萜类物质由环烯醚萜类物质在C7、C8处开环演变而来，该类物质是中药龙胆的特征性成分。龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷是龙胆生药学研究过程中研究最为广泛的3种裂环烯醚萜苷，尤其龙胆苦苷的研究最多。除以上3种化合物，国内外研究者通过化学和物理手段还从龙胆中发现多种环烯醚萜、裂环烯醚萜及其苷类。

2 三萜类

三萜类物质(也广泛存在于龙胆中。1995年林克勤首次在条叶龙胆中分离出齐墩果酸(oleanolic acid)和熊果酸(ursolic) ；此后，糙龙胆和滇龙胆的地上部分也分离出这2种化合物。2001年Kakuda等在糙龙胆中分离出l0个三萜类化合物。分别为：ehiratenol、Hop-17-en-3-one，Hop-17(21)-en-3p-ol、lupeol、a-amyrin、(20S)-dammara-13(17)，24-dien-3-one、(20R)-dammm-13(1)，24-dien03-one、chirat-16-en-3-one、chirat-17(22)-en-3-one、2lB-epoxyhopan-3-one。2002年，许敏等在滇龙胆中发现6种达玛烷型三萜化合物gentirigenic acid、gentirigeosides A，gentirigeosides B，gentirigeosides C，gentirigeosidesD、gentidgeosides。

3 黄酮类

黄酮是一类很强的抗氧化剂，多种龙胆中均含有黄酮类物质。近年来，中药龙胆中黄酮类物质的报道也逐渐出现。这些化合物均分离自龙胆的地上部分。2009年，赵磊等在滇龙胆中分离出化合物saponarin、isosaponarin、isoofientin；张敬莹等从糙龙胆地上部分得到Apigenin-7-O-B-glucoside、isovitexin、isovitexin-7-O-glumside；俞兆腾对龙胆中黄酮类物质的提取和测定方法进行了探讨研究[，龙胆中黄酮类物质具有很大开发潜力。

4 口山酮类

    口山酮是龙胆地上部分所含有的有效成分，在龙胆中主要以苷的形式存在。1821年首个黄酮类化合物龙胆根黄素)被成功从黄龙胆中分离出来。目前龙胆科多种植物中均发现口山酮类化合物。芒果苷是一种具药理作用的口山酮化合物，主要存在于百合科、漆树科植物中。1994年林克勤等首次从糙龙胆地上部分分离出芒果苷。

5 生物碱

生物碱也是药用龙胆中重要化学成分。龙胆碱、龙胆次碱、龙胆醛碱这3种生物碱又名秦艽碱甲、乙、丙。傅永丰于20世纪60年代在龙胆属植物秦艽中发现这类物质并为其命名。孙南君研究发现滇龙胆中亦含有这3种生物碱；此外龙胆中还含有龙胆黄碱。但也有研究认为，这些碱类物质可能是由于提取植物根中其他化学物质过程中加入了氨水促使龙胆苦苷等苷类成分转变成这些生物碱。

（三）龙胆有效成分的提取方法

1 热回流提取

热回流提取法可以减少溶剂的消耗，提高浸出率，常采用水提法或醇提法进行提取。同时应根据提取目标和原材料选择较好的提取工艺。杜仲中桃叶珊瑚苷的含量由分光光度法测得，桃叶珊瑚苷的最佳工艺是在70°C下提取3次，每次花时0.5h，溶剂甲醇的浓度为80％，料液比为1:12；而京尼平苷和京尼平苷酸的最佳提取工艺为70°C下提取1次，提取时间为1h，溶剂甲醇的浓度为50％，料液比也为1:12。嘲栀子总环烯醚萜苷提取中，比较了水提醇沉和醇提水沉的异同，前者样品有效成分的损失较大，而醇提和醇提水沉的样品则有较高的转移率，同时醇提水沉法较醇提法提高了栀子苷含量。

2 超声提取法

超声波产生的强烈震动、较高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用，可以加速溶剂渗入药材中，促使环烯醚萜溶解，此法程序简单，操作简便，提制时间大大缩短，且产量高，纯度好。徐吉银等确定了巴戟天中水晶苷的最佳提取方法为超声提取方法，提取溶剂是80％甲醇。刘涛等用70％乙醇对龙胆提取物进行超声提取，用紫外分光光度法测定了龙胆有效部位总裂环环烯醚萜苷的含量，并用高效液相色谱法测定了龙胆苦苷的含量。

3 超临界流体萃取

超临界流体萃取是一项新型提取技术，超临界流体常用二氧化碳为萃取剂。与传统提取方法相比，超临界萃取最大的优点在于可在近常温条件下提取、分离不同极性、不同沸点的化合物，几乎保留药材中所有的有效成分。没有有机溶剂残留。但常用的CO-SFE只适用于提取亲脂性、分子量小的物质，这就给提取环烯醚萜苷成分带来了一定的难度，但随着高压技术和夹带技术的发展，此方法也将得到广泛应用。

4 逆流色谱技术

高速逆流色谱技术以其高效、快速、低能耗、样品无损失等优点，在中草药分离、制备中的应用越来越广泛。采用高速逆流色谱技术(HSCCC)从龙胆中分离制备高纯度龙胆苦苷，以氯仿一甲醇一正丁醇一水(5:4:2:4)为溶剂系统，对龙胆甲醇粗提物进行分离，所得龙胆苦苷经HPLC分析，纯度达到96.68％，此研究为其他环烯醚萜苷的分离纯化提供了依据。

1.5阴离子交换树脂

利用大孔吸附树脂分离地黄中的梓醇时，发现大孔吸附树脂很难分离梓醇与糖类，故再利用阴离子交换树脂进行梓醇与糖类的分离，达到了分离、纯化梓醇的目的，为药材中环烯醚萜苷与糖类的分离、纯化提供了参考数据和方法。目前主要集中在山茱萸、缬草、栀子等药材。

二、^范文提纲

（一）前言

（二）仪器与试药

1 仪器

2 试药

（三）龙胆苦苷分析方法的建立

2.1溶液的制备

2.2色谱条件与系统适用性试验

（四）超声法提取龙胆中有效成份

1 单因素考察

2 正交试验设计

3 验证实验

(五)回流法提取龙胆中有效成份

1 正交试验设计

2 验证实验

（六） 闪提法提取龙胆中有效成份

1 正交试验设计

2 验证实验

（七）方法与结果

（八）结论

参考文献

致  谢

三、参考文献

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