银杏内酯在心血管的应用研究_开题报告

银杏内酯的分子结构银杏内酯分子具有独特的十二碳骨架结构 ，嵌有一个叔丁基和六个五元环 ，包括一个螺壬烷 ，一个四氢呋喃环和三个内酯环。银杏酯对血小板活化因子(PAF)受体有强大的特异性抑制作用，其中银杏内酯的抗PAF活性最高。PAF是血小板和多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷脂，是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂，它与许多疾病的产生、发展密切相关。而银杏内酯目前被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，其拮抗作用活性与化学结构密切相关。当内酯结构中R3为羟基或羟基数目增多时，对PAF的拮抗活性减弱;而当R2为羟基且R3为H时，则活性显著增强，其中以银杏内酯B对PAF产生的操拮抗作用最强，迄今对银杏内酯B的药理作用研究也最为集中。

银杏内酯的提纯

银杏内酯的提取及纯化方法有:溶剂萃取法、柱提取法、溶剂萃取-柱提取法、超临界提取法及色谱或柱层析纯化法等。银杏提取物中内酯类成分的含量测定可采用HPLC-UV法、HPLC-RI法、GC、HPLC-MS、NMR和生物测定方法等等，但因样品前处理技术不足，或因灵敏度不够，或稳定性和选择性相对较差，使结果均不太理想。目前，报道最有效的分析方法为HPLC-ELSD法。检测器为蒸发光散射检测器(Evaporative Light-Scattering Detector，ELSD)。这是一种HPLC用的新通用质量型检测器，不受外部环境的干扰，流动相在检测器中全部挥发，不干扰检测。经过线形实验、回收实验、稳定性实验等证明:ELSD检测银杏内酯的灵敏度和稳定性均能符合含量测定的要求，是一种较理想的简便实用的检测方法。其缺点主要是载气消耗较大。

三   银杏内酯在心脑血管方面的药理作用

1 降血脂、血黏和抗血小板活化因子

血小板激活在血栓形成过程中发挥着至关重要的作用。通常认为血小板的激活主要通过以下三种途径:一是与ADP的释放有关；二是以环加氧酶作为中介物形成的血栓A2(TXA2)； 三是PAF[2]。ADP和花生四烯酸(AA)通过激活前两条途径，导致血小板聚集；PAF是强有力的血小板激活剂，当有活化的白细胞存在时，还可以增强血小板和内皮间的黏附，是TXA2产生的有力刺激因子。研究发现[3]，银杏总内酯可明显对抗血栓形成，并具有显著的抗PAF和ADP诱导作用，能拮杭血小板活化因子引起的血小板异常聚集和血栓形成，降低血液黏度。崔姣等[4]人发现银杏内酯B衍生物能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量,显著延长大鼠混合血栓形成时间,对小鼠急性肺血栓形成有抑制作用, 并可显著缩短小鼠的喘促持续时间,具有一定的抗血栓形成作用。

2 防止血管动脉粥样硬化的形成

内皮细胞功能失调是动脉粥样硬化形成的起始步骤[5]。生理状态下，内皮细胞释放的NO减少，血小板聚集、单核细胞黏附和平滑肌细胞增殖；一旦内皮细胞功能障碍，NO合成和释放减少，未受伤但功能失调的内皮细胞通过其表面表达黏附分子与各种类型的白细胞结合，激活炎症细胞进入动脉壁，释放水解酶、细胞因子、化学因子和生长因子，引起斑块生长，启动动脉粥样硬化发生。陆晓茜[6]等 发现选用动脉粥样硬化斑形成的早期危险因素弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL , 40 mg/L)作为刺激因子作用于体外培养的ECV 304细胞，发现转移因子（TF）蛋白水平及mRNA水平显著增加，且[Ca2+]浓度迅速升高，而抗氧化剂GKB，可部分抑制mmLDL诱导的细胞内钙超载，在细胞的氧化损伤中具有一定保护作用。由此推侧GKB可预防动脉粥样硬化斑的形成，减少心血管事件的发生。Cheung等[7]利用THP-1 (a human monocytic cell line)巨噬细胞和HTJVEC(humanumbilical vein endothelial cells)探讨GK对NO生成的影响，结果表明:GKA，GKB可通过抑制巨噬细胞内iNOSmRNA的表达而减少NO的形成，但不影响eNOS介导的内皮细胞NO产生，从而治疗因NO失调导致的疾病。

3 抗氧化和抗缺血作用

 心肌缺血缺氧时，由于能量代谢紊乱，线粒体功能异常，其形态结构也可能发生异常变化，同时细胞内钙超载、自由基生成增多，而组织中清除氧自由基的SOD活性降低，导致氧自由基堆积，后者使膜脂质过氧化而致细胞损伤，引起细胞凋亡，心肌细胞数量减少；而再灌注又会造成细胞进一步损伤[8]。事实上细胞内钙超载、氧自由基损伤及细胞能量代谢紊乱是相互关联的。细胞缺血缺氧时， 引起酸中毒，Na+- H+交换增多致细胞内Na+增加，促使Na+-Ca2+交换加强，造成了细胞外Ca2+大量内流[9,10]。钙超载为氧自由基的生成提供了条件，氧自由基产生和消除之间的平衡被破坏，抗氧化系统受到损伤，自由基生成增多，诱发脂质过氧化反应其终末产物丙二醛与膜蛋白交联， 导致膜调节功能障碍，膜流动性降低而影响线粒体功能受抑制，线粒体受损，能量代谢紊乱。细胞能量代谢紊乱及氧自由基的存在使Ca2+通透性增加，更加重了细胞内钙超载，最终引起细胞损伤或死亡。高建等[11]研究发现银杏内酯能明显减轻大鼠心肌损伤，降低乳酸脱氢酶和肌酸磷酸激酶活力及丙二醛含量，对心肌缺血损伤具有明显的保护作用。此外，多个研究者发现银杏内酯能显著降低缺血缺氧损伤细胞中ROS、MDA及NO水平，升高SOD活性，且可减小胞内ATP水平降低程度，抑制细胞内钙超载和细胞凋亡，从而保护细胞 .

4 抗心律失常作用

 心肌缺血损伤后，其心肌电生理就会发生变化。心肌缺血是导致心律失常的主要因素。GKB已被证实具有改善心肌缺氧状态和抗心律失常效应。进一步研究发现，在生理条件下，GKB可缩短心室肌细胞动作电位时程(APD)，增大延迟整流钾电流，且呈浓度依赖性。由此提示GKB对抗心肌缺血所引起的心肌电生理的变化，从而预防心肌缺血所致的心律失常的发生。刘爱华[12]等发现，在生理状态下，银杏内酯可轻微缩短APD。在缺血状态下动作电位各项参数均减小，而银杏内酯通过维持缺血期间膜电位的稳定性，对抗缺血对跨膜电位的抑制效应，从而达到抗心肌缺血作用。

5 免疫调节功能

免疫学机制参与动脉粥样硬化发生发展的全过程，是缺血性心肌病重要的病理机一冠心病(CHD) 病人免疫机能常处于紊乱状态，银杏内酯有较好的免疫调节作用，对血液、循环、内分泌 等系 统发挥作用[13]。银杏内酯对缺血性心肌病的良好疗可能是免疫调节作用与多系统调节作用协同的结果。银杏内酯保护心肌缺血损伤的作用机制具有整体性和复杂性，其中的非循环机制是不容忽视的重要方面。这种非循环机制主要包括抗氧化、抑制钙超载、心肌缺血预处理、改善心肌超微结构、心肌酶和免疫功能调节等方面，它们不是简单的线性关系，而是交织成一个网络系统，相互作用和影响共同发挥心肌保护作用。

心脑血管疾病一直是一种严重威胁人类健康的疾病，不仅发病率高，而且患者有低龄化趋势。近年来，该病发病率呈逐年上升趋势，严重威胁人类健康问题，给家庭和社会造成的负担十分沉重。目前，药物是预防和治疗心脑血管疾病综合措施中极为重要的组成部分，因此开展防治缺血性心脑血管疾病药物的研究具有重要的理论和现实意义。银杏作为天然药物有着“疗效好、毒副作用小”的优势，具有良好的发展趋势，银杏内酯及其制剂的研发利用将会带来很好的经济效益和社会效益，造福人类 

   

四．关于银杏内酯应用研究的建议与展望

三、参考文献

电子文献：

[1]王旋,张慈灵,顾振纶,等.银杏内酯药理作用的研究进展[J].中草药,

2005,36（11）:1741.

[2]龚晓健,李运曼,卜惠敏,等.银杏总内RH抗血小板聚集与抗血栓作用

.中国临床药理学与治疗学,2006,11(7):822-825.

[3]余新建,刘育文, 高丽丽,等.银杏内酯在心血管方面的应用研究探

讨[J].中国医药导报,2008 ,5(9):172

[4]崔姣,潘苏华,刘成鼎,等.银杏内酯B衍生物对血栓形成的抑制作用[J].

广州中医药大学学报,2010,27(2):143-146.

[5]曾献,龚玉子,王焕姣.银杏叶的药理作用[J].湖南林业科技2008 ,35(1):

6-8.

[6] Lu XQ, Li XD, Zu SY, et al. Expression tissue factor gene induced by

mmLDL and inhibited by ginkgolides B in ECV304 [J]. Basic Med Sci

Clin, 2002, 22(3): 241-243.

[7] Cheung F, Siow Y L, Karmin O. Inhibition by ginkgolides and

bilobalide of the production of nitric oxide in macrophages (THP-1) but

not in endothelial cells (HUVEC)[J]. Biochem Pharmacal, 2001, 61(4503-510.

[8]崔磊,矫春晓,李敬田,等.银杏达莫在内皮细胞氧化损伤中保护作用

的实验研究[J].中国医药指南,2010,8(26):11-13.

[9]林悦,武宇明.银杏内酯中枢作用的研究进展[J].中国现代中药,11(2):

11-14.

[10]兰炜.银杏叶的药理作用研究[J].海峡药学,2010,22(9):82-83.

[11]高建，王秋娟.银杏内酯对结扎大鼠冠状动脉致心肌缺血的影响[J].

中国新药杂志,2004,13(10):887-902.

[12]刘爱华, 张志雄,银杏酮酯GBE50对正常及模拟缺血豚鼠乳头肌

动作电位的影响[J].中国中药杂志,2010,35(17):2342-2345.

[13]谷万里,史载祥.中药保护心肌缺血损伤的非循环机制研究进展[J]

[14]中西医结合心脑血管病,2005 ,5(3):422-425.