朵拉克汀含量及相关物质HPLC检测方法学研究开题报告

1.3 国内外检测方法研究现状

国外对在动物体内的朵拉克汀组织残留分析研究较多，并总结出了很多检测方法。

1.3.1 液相色谱-荧光检测方法

     Schenck等采用液相色谱法检测了牛奶中残留的朵拉克汀，可检测到的最低浓度为1ng/mL。Ali和Knold等采用同样的方法检测了猪和牛肝脏中残留的多拉菌素，结果表明，此法具有操作简单、灵敏度高、结果可靠等优点。[7-9]

1.3.2 液相色谱-紫外检测方法

阿维菌素类药物具有共轭二烯结构，在λ=245nm处有紫外吸收峰，用该方法结构较为方便，但是在此波长区域，皮质激素、脂类、维生素等这些内源性物质也有紫外吸收峰，这些组织内源性物质吸收困难，干扰检测。实际上，应用该方法成功检测的也只有血浆中样品比较成功（检测限达到0.002mg/L），组织内样品药物检测净化程序相当复杂。

1.3.3 液相色谱-质谱检测方法

由于荧光检测方法仅能得到样品的光学信息，无法对样品进行确证，采用质谱检测方法可以对样品进行确定。David A建立了LC-MS-MS方法检测牛奶中的ABA、DOR、IVR、EP、MOX、SL等。Howells以大气压化学电离（APCI）-离子阱-MS/MS方法测定了AVM、IVM、EP、DOR和MOX残留。Turnipsed等采用HPLC/APCI/MS方法检测了食品中的AVM残留。[10,11]

1.3.4 朵拉克汀原料药检测方法

目前朵拉克汀原料药未被ChP、USP、EP等各国药典收载，国内外相关报道也较少。根据ICH指南和FDA工业指南相关要求，对于起始原料、中间体、原料药分析中所用到来源于非药典或国家标准的相关分析方法（例如：微生物学的、生物学的、物理的、化学的），相对于药典有修改的分析方法，或用一个通用的方法来测一个新产品或新原料，均需进行分析方法验证，经验证后的分析方法可用于药品生产中间过程的控制、成品的检验、稳定性研究、以及工艺验证和清洗验证等。[12-14]

    方法验证的项目包括鉴别试验，杂质定量检测，杂质限度检测，原料药含量测定。针对不同的分析方法，验证内容不同，但表中列的只是一般情况，如有特殊情况，要视具体情况具体处理：

分析方法类型

验证内容

鉴别试验

杂质检测

含量/效价/溶出度

定量检测

限度检测

准确度

－

+

－

+

精密

度

重复性

－

+

－

+

中间精密度

－

+ 

－

+

专属性

+

+

+

+

检测限

－

－

+

－

定量限

－

+

－

－

线性

－

+

－

+

范围

－

+

－

+

耐用性

－

+

－

+

根据产品生产技术的转出方法辉瑞（Pfizer）提供的有关朵拉克汀制剂分析方法的检测[15-16]，结合实际生产工艺情况，以及对工艺产生的各杂质和降解杂质的检测方法进行分析方法开发，并进行全套的方法学验证。特别是该方法是否具有稳定指示性，是否可以用于稳定性试验的研究，都需要进行验证或者确认。

2. ^范文提纲

2.1 验证目的

2.2 验证仪器，设备，试剂，标准品

2.3 检测方法描述

2.4 验证内容

2.4.1专属性：包括强降解试验

2.4.2系统适应性

2.4.3精密度

2.4.4准确度

2.4.5线性

2.4.6 LOQ/LOD

2.4.7溶液稳定性

2.4.8耐用性

2.5 结果讨论

参考文献

[1]房春林,杨光友.多拉菌素的研究进展[J].中国畜牧兽医,2006,33(5):55-57.

[2]高玉红,郭照成,刘方悦.多拉菌素的研究进展及应用[J].东北农业大学学报,2009,40(4):141-144.

[3]张继瑜,李剑勇,周绪正,等.多拉菌素在猪体内的药代动力学[J].畜牧兽医学报,2005,36(7):722-726.

[4]高玉红,路义鑫,石艳丽.多拉菌素浇泼剂临床前毒理学试验研究[J].2010,44

(01):41-43.

[5]张萍,王加才,江善祥.多拉菌素在犬体内药代动力学研究[J].2007,22(03):389-

392.

[6]Mckellar Q A,Benchaoui H A. Avermectins and milbemycins [J].1996,19(05):331-

335.

[7]Ali M S,Sun T.Simultaneous determination of eprinomectin,moxidectin,abamectin

doramectin,and ivermectin in beef liver by LC with fluorescence detection [J]. 2000,

83(01):31-38.

[8]Knold L,Reitov M,Mortensen A B. Validation of a simple liquid chromatographic method for determination and quantitation of residual ivermectin and doramectin in pig liver [J]. 2002,85(02):365-368.

[9]Schenck F J,Lagman L H. Muhiresidue determinatioabamectin,doramectin,Iverme-

ctin,and moxidectin in milk using liquid chromatography and fluorescence detection

[J].Journal of Association of Official Analytical Chemists,1999,82(06).

[10]GoudieAC,EvansNA,GrationKAF.Doramectin-apotentnovelendectocide[J].VeterinaryParasitology,1993,49(1):5-15.

[11]Yas N E,Shamir M. Doramectin toxicity in a collie[J]. 2003,153(23):718-720.

[12] Guideline for Submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation. FDA, Rockville,MD, 1987.

[13] Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods .FDA,Rockville,

MD,1994.

[14]海正药业H2-SOP1-QC-G013 分析方法验证管理程序. 

[15]Pfizer.<D144.03>Identity and assay of doramectin by gradient high performance liquid chromatography.

[16]pfizer.<d144.04>Quantitation of process-related impurities in doramectin by gradient high performance liquid chromatography.