枸橼酸托法替布缓释微球的研制_开题报告

（一）枸橼酸托法替布介绍

枸橼酸托法替布（Facilitation Citrate），是一类被称为JAK抑制剂的处方药，最早由美国辉瑞（Pfizer）公司研发并上市，商品名Xeljanz。该药已在2012年11月在美国由食品和药物监督管理局（FDA）批准上市，于2017年03月10日获我国食品和药物监督管理局（CFDA）批准上市许可。产品自面世以来，已被80多个国家被批准使用，全世界约有9万多名患者使用过该药[1]。

（二）枸橼酸托法替布临床应用的研究进展

1. 抗类风湿关节炎

枸橼酸托法替布是新型抗类风湿关节炎药物，通过抑制JAK3 激酶活性发挥作用，临床主要用于对甲氨蝶呤治疗反应不足或不耐受的中度至重度活动性类风湿性关节炎（RA）的治疗[2-3]。枸橼酸托法替布是美国FDA十年来首次批准的新一类抗风湿病药物，与其他传统抗风湿病药物相比，它不仅能够缓解症状，而且还能减缓或停止疾病的损害。其临床治疗效果也与生物药如阿达木单抗等相媲美。目前为止临床主要以单抗或者融合蛋白治疗RA为主，其需要注射给药，而托法替尼作为一种口服型药物具有较大的优势，并且可以与甲氨蝶呤联用。

2. 治疗活动性银屑病关节炎

2017年05月，美国FDA受理了Xeljanz及Xeljanz XR的补充新药申请，用于活动性银屑病关节炎(PsA)成人患者的治疗[4]。该新药补充申请是基于III期临床开发项目OPAL的数据。该项目中包括2个关键性III期临床研究(OPAL Broaden，OPAL Beyond)和一个长期扩展研究(OPAL Balance)，评估了托法替布用于既往接受PsA药物治疗失败的活动性PsA成人患者的疗效和安全性。

3. 治疗溃疡性结肠炎

2017年5月在《新英格兰医学杂志》上，辉瑞公司研发的小分子JAK抑制剂托法替布治疗溃疡性结肠炎(UC)的三项III期临床试验结果研究证明，在中度至重度UC患者中，托法替布的治疗是有效的，而且许多患者的疗效可以持续一年多[5]。目前临床上，治疗UC的药物较为普遍，其中柳氮磺胺吡啶已有多年的历史，主要用于治疗轻度至中度的UC；中度至重度的UC常用的药物包括糖皮质激素类，但是因风险较大，一般不会作为长期的治疗手段；再者就是单克隆抗体药物，这类药物也存在一些缺陷，例如价格高昂以及给药的方式不够方便等。

4. 治疗强直性脊柱炎

强直性脊柱炎(AS)是一种侵犯脊柱、免疫介导的慢性系统性炎性疾病。II期临床研究已证实托法替尼在活动性AS治疗中的疗效和安全性。临床试验NCT01786668显示，在接受托法替尼治疗的AS患者中，近30%的患者可实现具有临床意义的脊柱MRI炎症下降；与安慰剂组患者相比，托法替尼组患者的骶髂关节评分和脊柱评分均有改善，并且具有剂量相关性；托法替尼组患者达到骶髂关节或脊柱MCID的比例是安慰剂组的4倍；达到MCID的托法替尼组患者临床应答率更高[6,12]。

（三）枸橼酸托法替布药理作用研究进展

    JAK是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶(PTK)，该蛋白家族族成员有7个同源区(JH1~7)。相关研究表明，JAK1、JAK2、TYK2广泛存在于各种组织和细胞中，JAK1与IL-6、IFN等炎症因子的激活密切相关，JAK2可单独介导EPO等细胞因子；JAK3仅存在于骨髓和淋巴系统，介导IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15 和IL-21的信号传导[7]。JAK-STAT信号通路是一条由细胞因子刺激的信号转导通路，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。

在信号通路内，信号转导物和转录激活因子 (STAT)被 JAK磷酸化后发生二聚化，继而进入核内调节相关基因的表达。枸橼酸托法替布可以抑制JAK激酶活性，在 JAK调控信号通路，预防 STAT磷酸化和激活[8]。与目前多数抗RA药物相比，枸橼酸托法替布以细胞内信号转导通路为直接靶点效果更强；枸橼酸托法替布对JAK3的抑制强度是 JAK1、JAK2 的 5～100倍，JAK3仅存在于骨髓和淋巴系统中，对RA的治疗作用特异性更好[11]。

（四）缓释微球剂型简介

微球(Microspheres)是一种用适宜高分子材料为载体包裹或吸附药物而制成的球形或类球形微粒，一般制备成混悬剂供注射或口服用，微球的粒径一般为1~500μm，小的可以是几纳米，大的可达800μm[9]。在微球制剂中，药物分散或被吸附在高分子聚合物基质中而形成微小球状实体，具有长效缓释或靶向作用，可以大大提升患者用药的方便性、依从性，在临床上具备显著优势和潜力。

聚乳酸是以乳酸为单体经缩聚反应合成的生物可降解高分子材料，在体内最终分解成水和二氧化碳，不会对人体产生伤害。在医学领域聚乳酸已被公认为是最有前途的可降解高分子材料，因而对它的研究开发极为活跃，而制备成微球载药系统也较为理想[10]。

（五）枸橼酸托法替布缓释微球研制的意义

    2012年，美国FDA批准Xeljanz上市申请，批准规格为5mg，剂型为片剂。2016年，美国FDA批准Xeljanz XR缓释制剂上市申请，批准规格为11mg，剂型也为片剂。该药是第一个批准上市每日一次的口服治疗RA药，适应症同Xeljanz，但是达到了缓释的目的。 

同样都是口服片剂，但是规格药量增加了一倍多，可见研制枸橼酸托法替布的缓释剂型具有重要应用意义，而目前并未见枸橼酸托法替布缓释微球的专利或研究报道。

二、^范文提纲

1. 绪论

1.1 研究内容

目前，枸橼酸托法替布剂型都是口服片剂，需要每天服药，未见相关专利报道研制枸橼酸托法替布的缓释微球。本实验用聚乳酸作为载体材料，将枸橼酸托法替布嗪制备成长效缓释的微球给药系统。

1.2 研究思路与方案

聚乳酸(PLA)作为可生物降解的材料在制备微球制剂中应用的最为广泛。聚乳酸微球的制备方法主要有乳化溶剂挥发法、喷雾干燥法、相分离法等，其中乳化-溶剂挥发法因为操作简便，无需特殊设备在实验室最为常用，乳化-溶剂挥发法又分为O/W乳化法、O/O乳化法和W/O/W法,分别适合于不同类型的药物。枸橼酸托法替布是水不溶性药物，可用O/W乳化法制备PLA微球。即将有机相首先加入到水相分散介质中，乳化几分钟，再将形成的乳剂加入到水相扩散介质中，挥发有机溶剂固化形成微球。

制备过程中工艺因素和处方因素对于微球的形态粒径的影响因素都很多，根据文献对各个因素进行单因素考察，确定一些对微球粒径形态、载药量及包封率影响较大的因素进行试验设计，本实验采用正交设计对各因素进行进一步考察，优化处方。经过单因素考察，我们将有机相PLA浓度、枸橼酸托法替布与PLA投药比、分散转数、分散介质浓度、有机相/分散相体积比作为正交试验的因素，每因素选取四个水平，按正交设计表做5因素4水平正交设计，考察对载药量和包封率的影响，最终确定出制备微球的最优处方和工艺。

1.3 解决的主要问题

    研制并优化枸橼酸托法替布微球剂型的实验室工艺。

2. 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.2.1 枸橼酸托法替布微球制备

本实验采用O/W型溶剂挥发法，即有机相分散-溶媒扩散法，将枸橼酸托法替布超声均匀分散在溶有PLA的二氯甲烷中，将此混合物慢慢倾入到一定溶度的含0.2%吐温20的海藻酸钠溶液机械搅拌形成O/W型乳剂，再将形成的乳剂倒入明胶溶液中，继续搅拌至溶液中的二氯甲烷全部挥发，离心收集微球，蒸馏水洗涤数次，真空干燥即得。

2.2.2 制备PLA微球的处方及工艺考察

采用有机相分散-溶媒扩散法制备微球。固定其他条件，改变单个因素，以载药量、包封率、粒径为主要考察指标，观察各个制备因素和处方因素对各指标的影响。包括搅拌方式、分散搅拌速度、分散时间、扩散搅拌速度、扩散时间、温度、有机相PLA的浓度、枸橼酸托法替尼和PLA的投药比、分散介质种类、分散介质浓度、有机相/分散相体积比、扩散介质种类、扩散介质浓度。

2.2.3 评价方法

以微球的载药量(S1)、包封率(S2)、跨距(S3)为考察指标，计算综合指数(S)，S= S1+S2－S3，对微球的制备工艺进行综合考察，用极差R的大小反映各因素对所测定指标的影响程度。

载药量（S1）=微球中所含的药物量/微球的总量*100%

包封率（S2）=系统中包载的药量/系统中包载的和未包载的总药量*100%

    跨距(S3)＝（D90-D10）/D50 ，D90、D10和D50分别为有90％，10％和50％的粒子数于该值的粒径。

2.2.4 标准曲线的制备

精密称取枸橼酸托法替布标准品20mg于100ml容量瓶，加入2ml二氯甲烷超声溶解微球，稀释至刻度作为标准储备液，精密量取该溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置100ml量瓶中，用重蒸水稀释至刻度得系列标准溶液，分别量取20μl进样高效液相测定，记录色谱峰面积。以甲磺酸多沙唑嗪浓度(C)峰面积(A)行线性回归，求得标准曲线。

2.2.5 回收率测定

    精密称取空白微球9份，每份 15 mg，每 3 份为同一剂量组，用二氯甲烷 2ml 溶解后转移至 100ml 容量瓶中，精密称定高、中、低 3 种三种剂量，用甲醇配制高、中、低 

3 种浓度溶液，精密量取一定量上述溶液用重蒸水配制成待测溶液，经 0.45μm 微孔滤膜过滤，取续滤液高效液相进样测定，记录色谱峰面积，代入标准曲线求其含量，计算回收率及 RSD 值。

2.2.6 正交试验设计

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

A

1

1

1

1

2

2

2

2

3

3

3

3

4

4

4

4

B

1

2

3

4

1

2

3

4

1

2

3

4

1

2

3

4

C

1

2

3

4

2

1

4

3

3

4

1

2

4

3

2

1

D

1

2

3

4

3

4

1

2

4

3

2

1

2

1

4

3

E

1

2

3

4

4

3

2

1

2

1

4

3

3

4

1

2

3. 实验结果

3.1 单因素优化结果

3.2 正交实验结果

4. 讨论

4.1 主要结果

4.2 问题讨论

4.3 展望

三、参考文献

孙垚峰. 高效液相色谱法测定枸橼酸托法替布含量[J]. 保健文汇, 2016(11).

Yamaoka K, Kubo S, Sonomoto K, et al. JAK inhibitor: tofacitinib, a new disease modifying anti-rheumatic drug[J]. Inflammation & Regeneration, 2011, 31(4):349-353. 

Flanagan M E, Brown M F, Subramanyam C, et al. Chapter Twenty-Five – Case History : Xeljanz™ (Tofacitinib Citrate), a First-in-Class Janus Kinase Inhibitor for the Treatment of Rheumatoid Arthritis[J]. Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2014, 49:399-416.

Jabbari A, Cerise J, Chen J C, et al. 277 An open label pilot clinical trial of the JAK inhibitor tofacitinib for alopecia areata[J]. Journal of Investigative Dermatology, 2016, 136(5):S49-S49.

Mohammad A A, Wu S Z, Ibrahim O, et al. Prevalence of atopic comorbidities in eosinophilic esophagitis: A case-control study of 449 patients[J]. Journal of the American Academy of Dermatology, 2017, 76(3):559.

吴照刚, 贾法强, 赵玉,等. 枸橼酸托法替布片剂及其制备方法:, CN 106420648 A[P]. 2017.

陈宇. 枸橼酸托法替布的合成研究[D]. 扬州大学, 2015.

潘红娟, 唐超, 倪翔,等. 托法替布及其光学异构体的NP-HPLC法分离与测定[J]. 中国医药工业杂志, 2016, 47(5):600-603.

龙娜, 吕竹芬. 微球缓释系统的突释现象及其影响因素[J]. 中国药师, 2010, 13(3):421-423.

顾志鹏, 李华, 蒋丽阳,等. 不同分散介质对壳聚糖载药微球缓释性能的影响[J]. 中国组织工程研究, 2009, 13(21):4128-4132.

李阅东, 沈如杰, 何海珍,等. 枸橼酸托法替布片剂药物组合物及质控方法:, CN 106370757 A[P]. 2017.

徐旭峰, 陈旦凤, 陈斌,等. 枸橼酸托法替布及其药用组合物在制备治疗干燥综合症的药物中的应用:, CN 105326844 A[P]. 2016.